• Santé - Interactions, Sonde, Membrane

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

L'ADN de sperme de saumon permet, pendant le southern blot (et d'autres techniques comme le gel shift (EMSA)), d'empêcher les interactions non spécifiques avec la sonde (un peu comme la BSA ou le lait dans les western blot ou en immunohistochimie).  [...] Plus précisément, si on ne l'utilise pas, on a des intéractions nitrocellulose-sonde parce que la membrane est chargée positivement (liaisons hydrogènes ou électrostatiques ) et que la sonde est ainsi bloquée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réalisation d'un Southern Blot

Le SDS joue entre autres le role d'un agent mouillant qui va permettre aux differents constituants du tampon (de préhybridation, d'hybridation) d'atteindre la membrane. Dans un Southern blot l'hybridation entre la cible et la sonde n'est pas libre comme dans une solution car l'ADN cible est fixée à la membrane de nylon et il y a une interaction complexe à l'interface entre une membrane solide et un liquide.  [...] Sans etre sur, (n'ayant jamais fait de southern) j'aurais tendance a penser que le SDS en tant que detergeant anionique permet de laver la membrane et de decrocher les interractions non specifique entre l'ADN (charge -) et la membrane de nylon (chargee +). Le SDS va prendre la place de l'ADN.  [...]

Immunologie : à la recherche de l'âme soeur | Dossier

Une particularité des lymphocytes B et T repose sur leur capacité, à priori illimitée, à détecter tout ce qui est étranger à l'organisme, en général sous la forme de fragments peptidiques. Dans le cas des lymphocytes T, objet de toutes nos attentions, cette détection nécessite une quête perpétuelle dont le but final sera de générer une véritable armée de descendants capables de combattre l'intrus et d'en garder la mémoire.   [...] Image montrant l'interaction entre un lymphocyte T et une cellule dendritique. Dans ce cliché, le lymphocyte T, beaucoup plus petit, contient une bio-sonde fluorescente, la protéine Akt PH-GFP, marquant sa membrane plasmique.  [...]

Southern bruit de fond

Depuis quelque temps, j'ai du bruit de fond sur une partie de la membrane.En effet, la sonde se fixe de façon non spécifique sur la partie non recouverte (en contact direct avec la solution d'hybridation + sonde) de la membrane.En général, la taille de la membrane étant supérieure à la circonférence de mon tube à hybridation, la partie de la membrane recouverte (chevauchement) est propre.  [...] S'agit-il d'un produit défectueux d'une dérive de la température du four.   [...]

[Biologie Moléculaire] Criblage d'une banque d'ADNc

Une autre partie de l'explication réside dans l'application de la banque d'ADNc. Tu auras toujours besoin d'une telle banque pour des cribles d'intéraction, de fonction, etc.  [...] je parlais des fonctions et des intéractions si on veut par exemple savoir quelle sont les protéines qui s'expriment dans X condition on peut le savoir à partie des ARNm marqués dans les deux conditions différemment (a jeûn et nourris, par exemple) et avec une puce à ADN on peut voir les intéractions pareille pour la fonction sauf quand utilise le northern blots(avec la sonde radioactifs).  [...]

[Biologie Cellulaire] Contrôler la pureté des protéines

Je l'ai étudié un peu pour les intéractions immunoglobuline/antigène, mais il parait que ça peut aussi s'utiliser pour des enzymes ou autres.  [...] Un gel shift Je pensais que ça n'était utilisé que pour les interactions ADN-protéine, puisque c'est la sonde ADN marquée qu'on visaualise.  [...]

Sos....rflp

je voudrais avoir des informations concernants les RFLP, c'est qu'on a fait un cours dessus et j'ai pas bien pigé.. j'ai cru comprendre que c'est des marqueurs génétiques pour détécter les mutations à l'origine des maladies,ils sont obtenus par Southern Blot ou PCR en cas de microsatellites..et la notion du PIC.   [...] RFLP sont les initiales de restriction fragment length PCR. C'est une technique qui consiste à amplifier un fragment d'ADN par PCR, puis de le soumettre à l'action d'une enzyme de restriction qui va couper les fragments amplifiés. Selon la présence et la position des sites de restriction, des amplicons qui semblaient identiques à première vue peuvent se révéler différents.   [...]

[Microbiologie] analyse profil hybridation moléculaire

svp comment je fais une analyse detaillè des resultats de la membrane hybridè avec une sonde 16s,ou d'un gene specifique.  [...] D'autre part, et je vous l'ai déjà dit également, il faut être un peu plus précis et donner un peu plus de contexte à vos questions si vous voulez de l'aide.   [...]

Imagerie calcique et canaux SOC

Lorsque l'on applique une molécule qui fait en sorte de relarguer les stocks calciques du réticulum endoplasmique lisse les canaux calciques SOC de la membrane plasmique s'ouvrent en réponse à cette vidange. Si on étudie le phénomène en imagerie calcique avec la sonde fura-2 par exemple on voit donc une augmentation du ratio car la fluorescence augmente (la sonde se lie avec le calcium cytoplasmique plus abondant).  [...] Ce que je ne comprends pas c'est pourquoi quand on met un milieu extracellulaire riche en calcium ensuite et qu'on observe le ratio réaugmenter (car le calcium rentre dans la cellule donc) on précise que le calcium rentre dans la cellule dans le but de remplir les stocks du réticulum endoplasmique lisse.   [...]

[Biologie Moléculaire] Sperme de saumon

C'est bien la raison pour laquelle les acides nucléiques cibles se fixent sur la membrane (northern ou southern), on peut donc consevoir que de la même manière la sonde peut aussi se fixer sur la membrane, et pas uniquement sur les acides nucléiques complémentaires.  [...] Saturer les sites libres de la membrane empechent donc la fixation aspécifique de la sonde, et donc un bruit de fond trop important.  [...]