• Santé - Intensité, Quantité, ADN

[Biologie Cellulaire] Résultat typique de FACS pour étudier le cycle cellulaire avec l’iodure de propidium

De plus, pour moi l'intensité de fluorescence n'est pas proportionnelle à la quantité d'ADN. Sinon, pourquoi expliquer un pic si énorme en G0 ou G1, et non après la phase S, en G2/M où la quantité d'ADN est doublée.  [...] Un peu d'intuition. a partir du moment ou tu sais que l'intensité de fluo est proportionnelle a la quantité d'ADN, il faut remarquer qu'il y a un pic majoritaire centré sur une valeur x d'intensité, et un pic secondaire d'intensité a peu près 2x. En se demandant dans quelle situation la quantité d'ADN double, on remarque du meme coup qu'entre les deux il y a une population hétérogène avec une quantité d'ADN non définie qui a des chances de correspondre au nombre de cellules en phase S.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

Cette fluorescence, est captée par un détecteur. Un ordinateur va permettre de la quantifier (et donc déterminer la quantité d'ADN dans chacune des cellules. plus une cellule est fluorescente, plus elle possède d'ADN et inversement). L'ordinateur va, en fonction des différents critères de taille et d'intensité de fluorescence, charger différement les cellules en leur ajoutant une charge positive ou négative ou pas de charge du tout d'ailleurs.  [...] Pour répondre ensuite à ta deuxième question, en fait j'ai déjà tout dit. Ton intensité de fluorescence est fonction de ta quantité d'ADN. Donc quand tu obtient ta courbe de la taille (par exemple si c'est ton critère de sélection) en fonction de ton intensité de fluorescence, les cellules peu fluorescentes sont les cellules avec peu d'ADN et donc en phase G0 ou G1, les cellules avec une fluorescence intermédiaire sont celles qui sont en train de répliquer leur ADN et donc en phase S et les petites dernières les cellules en phase G2 ou M.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et témoin négatif

une autre question, comment faire pr estimer la taille des bandes sachant que l'on dépose 7µL de produits PCR mais que la ladder correspond a 500ng d'ADN.  [...] Concernant la quantité relative. En général pour les ladders commerciaux, on peut connaitre la quantité d'ADN pour une ou plusieurs bandes du marqueurs de taille. Apres il faut comparer l'intensité du produit de PCR avec l'intensité des bandes du marqueurs de taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel ADN stress

Dans ton cas, je ne dirai pas que c'est le stress qui est entièrement responsable du résultat. Il y a beaucoup de paramètres qui peuvent expliquer ces différences de quantité après PCR (qualité des explants choisis pour l'extraction, qualité de l'extraction, PCR et réactifs capricieux, emplacement dans le thermocycleur...).  [...] NB (et à garder en tête). quand on fait une PCR classique, l'intensité des bandes reflètent en général la quantité d'ADN amplifié mais ce n'est pas strictement vrai et il ne faut pas conclure qu'on a plus ou moins d'ADN.  [...]

PCR et RT-PCR

Pour donner un exemple, si on veut amplifier des ARNm, on peut utiliser une amorce poly-T qui va venir s'hybrider sur la queue poly-A des ARNm. L'enzyme RT va ensuite allonger cette amorce et synthétiser l'ADNc (attention, il me semble qu'on parle d'ADNc uniquement quand il s'agit d'ADN obtenu par transcription inverse).  [...] Dans la PCR quantitative, on va quantifier la quantité d'ADN pr ésent dans un échantillon X en comparant l'intensité de la fluorescence émise par l'échantillon pendant l'amplification aux intensités d'une gamme d'ADN dont on connaît les quantités, amplifiés en parallèle.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage à l'iodure de propidium pour suivi du cycle cellulaire

Si j'ai bien compris le principe de cette méthode, la perméabilisation des cellules entraîne la sortie des fragments d'ADN de 180 bp, ce qui fait que l'intensité de fluorescence des cellules en apoptose est inférieure à celle des autres cellules (puisque proportionnelle à la quantité d'ADN), d'où l'apparition d'un pic en subG1.  [...] Le fait est que les deux méthodes ne quantifient pas la mort cellulaire de la même manière et que de nombreux biais peuvent s'y ajouter. Pour le bleu trypan par exemple, deux explications majeures s'affrontent ou se complètent. La première dit que les cellules sont colorées à cause d'une forte perturbation de l'intégrité de leur membrane qui devient perméable au bleu trypan.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

La spécificité se fait sur 2 éléments, la complémentarité des amorces sur la séquence d'ADN, donc on aligne quelques centaines de séquences de différentes espèces pouvant être dans notre milieu et on choisit deux sites spécifiques de notre espèce d'intérêt.  [...] Pour ce que tu nous raconte, il s'agit de PCR quantitatives où grosso modo il y a incorporation d'un element fluo pendant l'élongation (pour un type de qPCR donné) la détection s'effectue grace à un lazer qui va quantifier l'intensité de fluo qui augmente avec la quantité d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel

Déjà, il faut comprendre ce qu'on observe. le paramètre mesuré est un signal dont l'intensité dépend de la quantité d'intercalant intercalé dans l'ADN double brin. Ainsi, la différence de signal entre le début et la fin du run correspond à tout ce qui a été amplifié pendant le run.  [...] Ensuite, courbe d'amplification. votre signal décolle a partir d'un certain cycle, jusqu'a atteindre un plateau (pas important). Le moment ou le signal de chaque échantillon décolle, le Ct, est directement lié à la quantité d'ADN initiale. C'est d'ailleurs ce qui permet de le quantifier.  [...]

[Biologie Moléculaire] Courbes PCR en temps réel

Cette PCR est dite quantitative, puisque vu qu'on est capables de savoir a tout moment combien on a synthétisé d'ADN dans le tube, on peut déterminer la quantité initiale de matrice. Cette quantité initiale est déterminée a partir du nombre de cycle nécessaire a ce que l'intensité de fluorescence atteigne un certain seuil.  [...] Comme la fluorescence disparait quand l'ADN est dénaturé, lorsque l'on atteint la température de fusion de notre produit, il ya une grosse chute de l'intensité de fluorescence. On représente ça sous forme de vitesse de disparition de la fluorescence en fonction de la température, comme en C ou D.  [...]

Microscopie à force atomique : les membranes cellulaires se réorganisent

Lorsque l'intensité lumineuse est faible, la proportion de collecteurs de lumière est plus importante. Pour gérer l'ensemble de cette lumière récoltée, les centres réactionnels s'agencent entre-eux de manière à éviter de trop grandes pertes. en effet si une trop grande quantité de lumière est perdue, elle peut entraîner la formation de radicaux nuisant à l' ADN et aux protéines et à terme endommager la bactérie.  [...] L'utilisation de bactéries comme modèles d'étude présente de nombreux avantages par rapport aux plantes. obtention rapide de matériel biologique stable et en grande quantité, connaissance des structures atomiques de tous les constituants membranaires, possibilité de contrôler les conditions de croissance.  [...]