• Santé - Intensité, Hybridation, Expression, Cellule

Expression de gène

Et étant donné qu'on a un amplification proportionnelle des ARNm l'intensité de la couleur des spots suite à l'hybridation nous renseignera sur la forte ou faible expression de ceux-ci dans la cellule en comparant avec des témoins.  [...] L'hybridation in situ apporte en plus la localisation de l'expression des gènes sur une coupe histologique (tissu cellulaire). Non seulement on sait si le gène est exprimé et à quelle intensité il l'est mais on sait aussi quelles sont les cellules du tissu qui les expriment (toute les cellules d'un organisme ont le même génome mais pas le même transcriptome).  [...]

[Biologie Moléculaire] Puces à ADN

Par exemple, tu veux étudier les gènes transcrits dans une pétale et dans une fleure(la même espèce). Tu prélèves les ARN du pétale et de la fleur, tu marques par exemples les ARN de pétale en vert, et la fleur en rouge. Ensuite tu fais une hybridation sur la puce, et ainsi tu peux faire une comparaison du profil d'expression.  [...] Dans mon cas, on veut tester l'effet d'un traitement. Donc, on marque en vert l'ADNc non traité (contrôle) et l'ADNc avec le traitement en rouge (test). Après hybridation avec la sonde, si expression contrôle=expression test. le traitement n'a rien changé, si expression contrôle.  [...]

Quel est le principe de la SNP-array?

Question simple pour une fois. j'ai du mal à comprendre le principe de fonctionnement de la SNP-array, particulièrement sa façon de nous renseigner sur les CNV..Contrairement à la CGH-array, il n'y a pas d'hybridation compétitive..à ce que j'ai compris, les valeurs d'intensité sont comparées à un pool.  [...] .. Pourtant, il me semble que toutes les expériences d'hybridation sur puces à ADN sont réalisées à saturation, alors je ne comprends pas du tout comment on peut avoir différentes valeurs d'intensité, qu'il y ai perte ou gain de matériel génétique.  [...]

[Génétique] comment savoir qu'un gène est sous silence

- induire la traduction puis réaliser un Western blot avec un anticorps, si il n'y a aucune révélation c'est qu'il n'y a pas de protéine et donc que le gène est sous silence.   [...] Cela dépend de ton matériel biologique, mais par exemple une hybridation in situ montrera l'expression ou non d'un ARNm.  [...]

[Biotechnologie] Anticorps monoclonaux

Bonjour, je suis en 3eme année de pharmacie, je révise mon cours de biotechnologies sur la production d'anticorps monoclonaux, et je me pose une question. j'ai bien pigé la méthode d'hybridation de Kohler et Milstein, mais je comprends pas pourquoi l'hybridation avec une cellule de myélome est nécessaire.  [...] Je pense que cela est nécessaire pour que les lymphocytes (plutôt hybridomes dans ce cas là) soit transformés en plus d'être immortels. Ainsi ils ont des capacités de prolifération exploitable pour la production d'anticorps en grande quantité. En effet les lymphocytes sont bloqués au niveau prolifératif, ils ne peuvent que se différencier en plasmocytes.   [...]

[Biochimie] Biologie cellulaire proteine

Immunofluo pour l'histologie, immunogold si on cherche une localisation en microscopie électronique. On peut aussi faire un tag-GFP. Promega a mis au point un autre tag dit HaloTag qui permet de réaliser le couplage avec un fluorochrome tout en gardant la cellule en vie.  [...] En première approche l'immunohisto est pas mal. Maintenant si cette protéine ne diffuse pas vous pouvez aussi faire de l'hybridation in situ des transcrits. Vous n'aurez pas la protéine proprement dite mais vous aurez le profil d'expression. L'intérêt est que vous pouvez toujours faire une hybridation in situ alors que vous êtes dépendant des anticorps pour l'immuno.  [...]

[Biologie Moléculaire] miRNA (ou microARN)

..) à savoir que la différenciation cellulaire ne reposerait pas nécessairement sur la mise en place d'un programme transcriptionnel plus ou moins spécifique par activation (ou répression) de l'expression de certains gènes mais peut-être par levée d'inhibition (ou mise en place d'inhibition) via ces miRNA, ce qui est loin d'être la même chose.  [...] Il semblerait aussi que l'hybridation des mi/ si RNAs sur le gène dont ils contrôlent l'expression recrute des histones méthyltransférases - via un RISC nucléaire (le même que celui du cytoplasme), responsables in fine de la formation d'hétérochromatine.  [...]

Inactivation de l'expression des gènes par RNAi ?

Ensuite tu as hybridation de ce siRNA simple brin sur son mRNA cible et clivage du mRNA par Risc. ton mRNA est dégradé et ne peut donc pas être traduit...tu as down régulé l'expression de ton gène.  [...] tu utilises un complexe de ribozyme pour dégrader plusieurs ARNm différents.Cà a nottament été testé pour diminuer la résistance à la chimio de cellules cancéreuse en down régulant l'expression des transporteurs ABC (P-gp, MRP2 et BCRP) responsablent du reflux de xénobiotiques hors de la cellule.  [...]

[Biochimie] Arn

On utilise cette propriété pour faire de l'hybridation in situ également. On incube des coupes de tissu avec un brin complémentaire d'ARN ou d'ADN marqué qui va s'apparier spécifiquement à l'ARN cible. Cela permet de visualiser l'expression d'un gène au sein d'un tissu par exemple.  [...] Tout est un souci d'effort. La cellule ne va pas s'amuser à dépenser 2 fois plus d'énergie à produire du double brin si ça ne lui amène pas un avantage conséquent, tel que la sauvegarde de son génome, dans le cas de l'ADN.  [...]

Banque d'expression et banque d'ADNc

Je voudrais poser une question qui va surement paraître un peu bête, mais je n'arrive pas vraiment à saisir la différence entre une banque d'expression et une banque d'ADNc… Toutes d'eux contiennent de l'ADNc, donc la différence c'est juste qu'on ne les utilise pas aux mêmes fins Mais si la banque d'ADNc contient de l'ADNc, alors elle pourrait aussi permettre la production de protéines… non.  [...] Bizarre, pourtant dans notre cours ces deux banques sont vraiment classées dans deux catégories différentes. En fait notre prof ne fait la différence qu'au niveau du criblage. elle dit que la banque d'expression ne peut être criblée que par des anticorps marqués (donc marquage de la protéine traduite) tandis que la banque d'ADNc peut être criblée comme l'ADNg par hybridation, ou bien comme la banque d'expression par AC… Mais pour moi ce qui est dit pour l'une est vraie pour l'autre aussi ^^'.  [...]