• Santé - Induction, Expression, Protéine

Vers un nouvel antibiotique qui pousse les bactéries au suicide ?

Il s'agit d'un duo de gènes placés côte à côte (un opéron) qui codent l'un pour un poison (une toxine ) et l'autre pour son antidote (une antitoxine). En temps normal, la synthèse de la toxine à l'intérieur de la cellule bactérienne n'a pas d'effet, si tant est que l'antitoxine (qui inhibe l'action de la toxine en la dégradant ou en empêchant sa production) est synthétisée simultanément.   [...] Les chercheurs ont remarqué que l'induction de l'expression d'une protéine PezT légèrement mutée (tronquée des onze derniers acides aminés ), de façon à la rendre moins toxique, induit un défaut de division cellulaire menant au bout d'une heure à une mort massive des bactéries.  [...]

Discussion | Dossier

Ce résultat concorde avec d'autres travaux publiés montrant que l'expression de la COX-2 peut être induite par différentes enzymes comme les MAP kinases (Rizzo M.T. et al., 1995), par l'intermédiaire des protéines p24 et p44.  [...] Par contre, ces composés n'interagissent pas avec la p38 kinase et la protéine JNK, elles aussi impliquées dans l'induction de l'expression de la COX-2 (Barry O.P. et al., 1999). A la vue de ces résultats et de ces remarques, il nous a semblé inopportun de continuer à chercher un moyen d'inhiber l'expression de la COX-2, ainsi pour limiter la production de prostanoïdes par cette enzyme conduisant à l'inflammation cellulaire, il nous faudra donc diminuer son activité enzymatique.  [...]

[Biotechnologie] Induction vs. expression

je travaille actuellement sur un projet de clonage d'une protéine, et j'ai un peu de mal a comprendre la différence entre l'induction et l'expression d'une protéine.  [...] Par exemple, tu va avoir une séquence avec un promoteur inductible, qui une fois activé induira l'expression de la protéine en amont de la séquence.  [...]

[Microbiologie] Lysogénie

Le répresseur est une protéine synthétisée par le bactériophage et qui se fixe sur des opérateurs viraux. Ce répresseur bloque la majorité des fonctions virales...Le répresseur peut être inactivé et cette inactivation permet l'expression du prophage...La fréquence de l'induction est augmentée par les rayons UV, les rayons X, l'ypérite, l'éthylène-imine, des peroxydes organiques, etc.  [...] Du coup j'ai bien l'impression que personne ne décide ou du moins la décision à l'air diffuse et ne résulte pas d'un signal précis émis par un acteur biologique précis.   [...]

[Biochimie] Purification de protéine recombinante de faible PM

Normalement, faire un western afin de valider la production de la protéine dans le système d'expression est la première chose à faire. Cela peut éviter de gaspiller inutilement le matériel nécessaire à la purification de la protéine.  [...] Je ne suis pas tout a fait d'accord. Tu DOIS voir ta proteine en coomassie. Si tu ne la vois qu'en WB tu peux considerer que l'expression n'est de toute facon pas suffisante pour une purif alors il faut travailller les conditions d'induction, rien ne sert de depenser ton temps et ton energie en WB.  [...]

surexpression d'une protéine dans E.coli

je suis en train d'essayer de surexprimer une protéine dans E.coli, et elle me pose beaucoup de problème. l'expression de la protéine en question est induite par l'addition d'IPTG dans le milieux de culture (milieux LB). et j'arive à la produire, le problème est que ma protéine qui devrait être soluble, je ne la retrouve plus dans les protéines solubles mais dans le culot après sonication des bactéries.  [...] Classique lors de la surexpression... la proteine s'aggrege et se retrouve insoluble. Comme précisé plus haut, tu peux essayer plusieurs temperatures d'induction, mais tu peux aussi essayer un temps d'induction moins long (3h suffisent en general), ou alors changer de souches de coli parfois ca change tout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Par rapport à mon vecteur pGEX5x1 on peut aussi voir qu'il y a de l'expression de protéines même sans induction (contrôle. DH5alpha non transfectées). Au bout de 2h l'induction n'a pas franchement dépassé la production endogène. Au bout de 12h la différence est très nette montrant que l'induction active bien le plasmide.  [...] Conclusion. On peut produire des protéines en DH5alpha grâce aux vecteurs pGEX. Cependant la dégradation induite par les protéases ne semble pas négligeable. Le represseur LacI q du vecteur n'eteint pas totalement l'expression du gène chimère. Peut être un problème à prendre en considération pour les protéines toxiques.  [...]

[Biologie Cellulaire] Expression des protéines

PArles-tu d'une expression après transfection d'un plasmide codant un ADNc ou d'une expression après une induction par un stimulus.  [...] En fait ce que je pense à faire est. une inhibition exogène par un anticorps dans un premier lieu et une induction exogène par une protéine recombinante pour voir les variations de mes protéines d'intérêt ( mitochondriales + MEC).  [...]

[Biotechnologie] Biotechnologies....

Mardi. Préparation des cultures pour l'expression. induction. L'expression se fait la nuit, pendant que je dors peinard (ou autres options plus câlines).  [...] Par exemple produire une proteine recombinante peux se faire sans materiel particulier ou au contraire avec des instruments sophistiques, tout depend de l'echelle de production, de la purete et de ce qu'on veut en faire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Causes d'échecs de la production de protéines recombinantes

En première intention on peut baisser la température de culture de sorte à ce que le métabolisme de la cellule ralentisse. Elles meurent moins vite et on a plus de protéines. On peut aussi diminiuer l'induction si l'expression est inductible.  [...] Concernant la protéine mal repliée, il a dit que des peptides signaux étaient utilisés afin de l'orienter vers le périplasme car il est moins réducteur que le cytoplasme (formation des ponts dissulfures) et enfin pour le problème lié à l'homme c'était surtout un problème de sécurité donc il faut s'assurer que le système d'expression n'est pas toxinogène par exemple.  [...]