• Santé - Idée, Tampon, Détergent

[Biologie Cellulaire] HEK et ultracentrifugation

je voudrais faire une ultracentrifugationd différentielle à partir de HEK transfectées avec mon plasmide x. le problème c'est que je n'arrive pas à casser mes cellules. j'ai essayé le potter en verre, le teflon... rien n'y fait. une idée je ne peux pas les soniquer ou utiliser un tampon avec détergent sans compromettre l'ultracentri.  [...]

additifs pour la cristallisation des proteines membranaires

C'est assez curieux la formulation de ta question parce que pour moi si on en réfère au paragraphe cité en dessous, le glycerol et le lauryl dimethylamine oxide sont tous les 2 des additifs dans le tampon NaCl/Hepes. Vu qu'ensuite tu parles de détergent alors c'est le lauryl dimethylamine oxide qui est l'additif.  [...] Cependant il n'y a pas un coktail d'additif et de détergents précis. Il y en a beaucoup, et tu n'es pas sans savoir que cristalliser une protéine membranaire c'est la croix et la bannière (y a qu' a voir la PDB) donc en général on fait les tampon de cristallisation à taton (maintenant ce sont même des labos ultra équipé avec de la robotique qui s'amusent à faire des centaines de cribles pour trouver le bon tampon qui va bien).  [...]

[Biochimie] Interaction protéine/protéine - ultrasons

il te faut préparer un tampon de lyse gentil (style Tris pH7,5, EDTA, NaCl, un détergent soft (triton, NP-40) et quelques inhibiteurs de protéases (PMSF, aprotinine, leupeptine, pepstatine, NaF...). Ce genre de tampon est relativement facile a faire et a trouver.  [...] ah je ne pense pas que ce genre de tampon soit idéal pour extraire des protéines ancrées à la membrane (pas de détergent fort), mais je ne suis pas un spécialiste de ces protéines.  [...]

Isolat de protéines

Je ne pense pas que l'extraction de protéines varie tant que ça d'un matériau biologique à l'autre. Donc il suffit juste de faire un broyat de pois/soja. Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20).  [...] Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20). Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature.  [...]

Principe électrophorèse capillaire

Principe. Capillaire rempli de polyacrylamide, tamisage des molécules à rapport charge sur taille constant, dénaturation des macromolécules possible.   [...] Principe. Chromatographie de partage et séparation électrophorétique d'analytes chargés et neutres. Détergent. Couche micellaire critique, micelles (phase hydrophobe) et électrolyte de tampon (phase hydrophile).  [...]

Interaction cellule/virus

la force ionique peut modifier l'équiligre de l'intéraction récepteur-ligand. Donc rester pour les manip dans un tampon physio.  [...] Mais dans mon idée, j'utilise un detergent, qui devrait lyser le tout, donc au final, je bosse plus vraiemnt sur un virus entier.  [...]

[Biologie Cellulaire] Centrifugation du foie !

Que sommes nous censés avoir aprés une centri d'un homogénat du foie en présence du Tampon phosphate et absence de détérgent à 1000g pdt 10 minutes, puis la centri du surnageant obtenu à 12000g pdt 10 minutes.  [...]

[Biochimie] A quoi ça sert?

la soude doit jouer le rôle de detergent pour détruire la membrane mais on doit un peu l'aider ( broyer ) on doit ajouter le tampon avec... apres ca doit etre la centrifugation différentielle pour séparer adn de arn et le tour est joué^^.  [...] oui d'abord il faut détruire les mbranes, le cytosol et le contenu du noyau vont donc se mélanger, la c'est au tour du dénaturant de faire effet, il doit y avoir qqchose en plus du tampon genre SDS.  [...]

utilisation du tween 20

Je voulais savoir à quoi servait le Tween 20 qu'on utilise dans la solution contenant l'Ac lorsqu'on fait une immunodétection.   [...] Le tween est un détergent. Dans un tampon d'ELISA ou de western blot, il est très dilué afin d'éliminer les interactions non spécifiques. Certains ne l'utilisent que dans les tampons de lavage, certains dans tous les tampons avec globalement le même résultat final.  [...]

[Biochimie] Caractéristiques des tampons utilisés en ELISA

Après l'étape de saturation du puits, on ajoute l'anticorps secondaire portant un marqueur de révélation. On ajoute également du Tween 20 et de la BSA dans le tampon véronal où celui ci est dilué.  [...] Le Tween 20 est un détergent qu'on utilise généralement pour limiter les fixations non spécifiques. Seulement voila, dans une série de manip', j'ai dilué mon anticorps secondaire dans du tampon véronal pur (càd sans BSA, ni tween). A ma grande surprise, je n'ai eu AUCUN signal dans tous les cas (donc, aucune fixation de mon anticorps secondaire Pourquoi ).  [...]