• Santé - Hybridation, Sonde, ADN, Membrane

[Biologie Moléculaire] marquage à la digoxigènine

mon pb se situe au niveau de l'hybridation de ma sonde avec de l'adn fixé sur une membrane.  [...] JE cherche à savoir la composition du tampon d'hybridation. Sur le site de roche il me conseil d'utiliser le leur ce qui est commercialement normal et il me donne 3 compositions différentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réalisation d'un Southern Blot

Le SDS joue entre autres le role d'un agent mouillant qui va permettre aux differents constituants du tampon (de préhybridation, d'hybridation) d'atteindre la membrane. Dans un Southern blot l'hybridation entre la cible et la sonde n'est pas libre comme dans une solution car l'ADN cible est fixée à la membrane de nylon et il y a une interaction complexe à l'interface entre une membrane solide et un liquide.  [...] Pour imager un peu, le SDS est un savon, et on lave mieux avec du savon que sans. et comme le nylon chargé positivement des membranes n'est pas forcement très hydrophyle, il permet aussi de mieux réaliser l'interface entre ADN/Membrane et la solution.  [...]

[Biologie Moléculaire] probleme avec ma PCR

Je dispose d'ADN dans lequel je dois amplifier un gene particulier. Disons A. Apres plusieurs PCR je n'ai aucun resultat. Alors que quand je transfert cet ADN sur membrane et que je fais une hybridation, j'ai des signaux. Ma sonde est le gene que je cherche mais amplifie avec un control positif.  [...] Si j'ai des signaux apres hybridation,c'est que dans mon ADN il ya une sequence homologue au gene A. Mais pourkoi avec la PCR je n'arrive pas a amplifier. Mon ADN est pur et l'amorce fonctionne bien puisqu'elle amplifie bien avec le control positif.  [...]

Southern bruit de fond

Depuis quelque temps, j'ai du bruit de fond sur une partie de la membrane.En effet, la sonde se fixe de façon non spécifique sur la partie non recouverte (en contact direct avec la solution d'hybridation + sonde) de la membrane.En général, la taille de la membrane étant supérieure à la circonférence de mon tube à hybridation, la partie de la membrane recouverte (chevauchement) est propre.  [...] S'agit-il d'un produit défectueux d'une dérive de la température du four.   [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse.  [...] Je pense qu'il pourrait s'agir de la transcription inverse cependant un détail m'intrigue. l'hybridation de la sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse. La transcription inverse s'effectue dans un tube sans que les ARN aient été séparés auparavant.  [...]

Hybridation in situ

Donc si je comprend bien le principe, l'ADN de saumon se fixe sur l'ADN et l'ARN du tissu sur lequel je veux faire l'hybridation in situ, et quand je dépose la ribosonde spécique il y a une compétition entre l'ADN de saumon fixé et la sonde, diminuant ainsi le marquage aspécifique tandisque ma sonde se fixe sur l'ARN que l'on veut mettre en évidence.  [...] C'est juste que ta sonde peut se fixer sur des sites aspécifiques. Si le nombre de site aspécifique du à l'ADN de saumon est superieur au nombre de sites andogènes alors la probabilité qu'une hybridation aspécifique se fasse avec l'ADN de saumon est plus grande que celle qu'elle se fasse avec du matériel endogène.  [...]

Hybridations plasmides et sondes

Cette manip te permet de visulaiser quelles colonies (et donc quels plasmides) contiennent ta sequence d'interet (tu auras un spot noir sur ta photo). Ensuite, il ne te reste plus qu'à recuperer les colonies identifiées sur ta deuxieme boite de petri (identique à ta membrane de nitrocellulose puisque replique), a les relancer en milieu liquide pour en extraire l'ADN plasmidique (manip 2).  [...] oui j'entendais plus propre dans la mesure ou on ne fait pas tremper les bactérie dans un milieu agressif et qui dégrade les membranes c'est tout. Et il me semble que la quantité intégrable dans un phage est assez restreinte du fait de la taille maximum d'encapsidation.  [...]

[Microbiologie] Hybridation

Coucou tous le monde, au fait je vais faire de l'hybridation avec une sonde 16s et une sonde d'un gene de résistance,pour voir si le gene est chromosomique ou non, (puisque le 16s est du chromosome),pour la digestion donc j'ai utilisé l'enzyme. Iceu-1 (qui coupe l'adn) mais lors de la migration.  [...] Non, cette enzyme a tendance à rester accrocher à son site de coupure. Le SDS va dénaturer l'enzyme, qui va donc se décrocher. Il faut donc l'ajouter après la digestion et avant la migration de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

j'ai réalisé une hybridation moléculaire avec des sonde 16S et des sonde spécifiques d'un gène avec les fragments d'ADN d'une souche bactérienne.Le profil d'hybridation avec la sonde spécifique du gène m'a donné une seule bande de taille 2 megabases. Mon prof ma dit qu'elle correspond à un mini-chromosome.  [...] Un minichromosome, par définition c'est un petit chromosome. avec les télomères, un centromère, une origine de réplication, et quelques pseudogènes (éventuellement des gènes peut-être) mais qui est plus petit que les chromosomes présents dans l'espèce, et capables de ségrégé correctement.   [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

Jusque là tout vas bien. sur notre ADNg. on a bien deux sites de restrictions adjacents HindIII qui donnent un fragment de 0,3Kb et qui hybrident avec ma sonde H.  [...] D'après moi, cette expérience confirme mon hypothèse de présence d'un intron de 0,8Kb sur le fragment d'ADNg de 1,8Kb NcoI/NcoI. En effet, si on obtient deux bandes radioactives, c'est que notre fragment de 1,8Kb est coupé en deux par l'enzyme HindIII & la sonde N hybride avec ces deux fragments.  [...]