• Santé - Hybridation, Cellules, Anticorps

[Biologie Cellulaire] Télomères et vieillissement

Petite question à moitié HS. pour la production d'anticorps monoclonaux, on crée un hybridome en associant un lymphocyte B à une cellule cancéreuse. Quel est le but de cette hybridation Faire en sorte que le lymphocyte se reproduise indéfiniment.  [...] Oui, c'est utile pour obtenir des anticorps monoclonaux en grande quantité. L'hybridation permet d'avoir une population durable et génétiquement stable de cellules productrices d'anticorps strictement identiques.  [...]

[Biotechnologie] Anticorps monoclonaux

Bonjour, je suis en 3eme année de pharmacie, je révise mon cours de biotechnologies sur la production d'anticorps monoclonaux, et je me pose une question. j'ai bien pigé la méthode d'hybridation de Kohler et Milstein, mais je comprends pas pourquoi l'hybridation avec une cellule de myélome est nécessaire.  [...] Je pense que cela est nécessaire pour que les lymphocytes (plutôt hybridomes dans ce cas là) soit transformés en plus d'être immortels. Ainsi ils ont des capacités de prolifération exploitable pour la production d'anticorps en grande quantité. En effet les lymphocytes sont bloqués au niveau prolifératif, ils ne peuvent que se différencier en plasmocytes.  [...]

[Immunologie] Immuno-marquage

Un lourd sacrifice qui nous permettra de récupérer son sérum. Le sérum c'est en fait le plasma sanguin sans plaquettes ni cellules. On aura donc juste un plasma sanguin avec les anticorps qu'il nous faut. Voilà, mais en fait, le lapin va sécréter différents anticorps correspondant aux différents épitopes de la protéine.  [...] Mais faut savoir que chaque plasmocyte ne sécrète qu'un seul type d'anticorps. On choisira qu'un seul plasmocyte et on va en faire un hybridome( en gros. hybridation entre une cellule cancéreuse et un plasmocyte). Pourquoi on fait ça Tout simplement pour rendre le plasmocyte immortel car dans le corps le plasmocyte a une durée de vie très courte(de l'ordre du dixaine de jours si je me rappelle bien mais on s'en fou en fait ) Et donc voilà on a donc une jolie culture de plasmocytes qui sécrètent tous des anticorps contre la protéine qu'on veut observer.  [...]

selection de cellules par la technique de l'hybridation in situ

Je ne comprends pas tres bien la technique d'hybridation in situ, pour observer si un mRNA particulier est exprimé au sein d'un tissu ou d'une cellule, il faut bien faire éclater les cellules. Et parfois on nous dit que ça nous permet de voir quelles cellules ont intégré un transgène par exemple et de les sélectionner.  [...] On incorpore dans la sonde des UTP-dig. On revele ensuite avec un anticorps primaire anti-dig puis un anticorps secondaire couplé à la peroxydase. Enfin on ajoute au milieu deux reactifs (dont je vous eparge les noms complets) NBT et BCIP. Le produit de réaction est bleu/violet.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunocyto - Comment améliorer la fixation ?

Ensuite, pour faire l'hybridation de l'anticorps, je dépose mes lamelles sur des petits capuchons. Au final, ca permet je pense d'utiliser moins d'anticorps mais surtout de les monter facilement sur lamelle.  [...] Le problème du verre c'est que certaines cellules adhèrent mal dessus. Pour essayer de palier ce défaut on colle dessus des molécules qui vont simuler une matrice extra-cellulaire. On peut coller par exemple des collagènes, des fibronectines. Cependant aujourd'hui le plus courant est de couvrir la lamelle (on coat) avec des molécules de polylysine. Tu peux en trouver chez sigma.  [...]

biologie moléculaire

connaisons que toutes les cellules d'un meme animal contiennent des génomes identiques, dans une expérience, un tissu composé de multiples types cellulaires est fixé et soumis à une hybridation avec une sonde d'ADN spécifique d'un géne particulier. à votre grande surprise, le signal d'hybridation est brin plus fort dans certaines cellules que dans autre, est ce quelqu'un peut me donner une explication détaillée.  [...] si ta sonde n'hybride que les ADN, ca pourrait représenter la différence d'accessibilité des gènes spottés, dans les cellules ou le signal est le plus fort on aurait un gène plus accessible qui suppose une plus forte expression.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

La déshybridation, je n'ai jamais trop aimé, rien ne vaut la première hybridation. Si la déshybridation ne se fait pas très bien, si l'anticorps précédent est très affin pour son antigène, il reste un fort bruit de fond et la fixation du second anticorps primaire n'est pas optimale.  [...] ...Dans le cas où les deux protéines ont des poids moléculaires suffisamment espacés, on peut couper la membrane entre les deux tailles attendues (grâce au marqueur de taille) et faire l'incubation de chacune des parties avec l'anticorps adéquat. Ou alors, si les deux protéines ont des tailles proches, il y a trop de risque de couper des bandes d'intérêt, donc on peut faire migrer deux gels en parallèle.  [...]

[Biochimie] Biologie cellulaire proteine

Immunofluo pour l'histologie, immunogold si on cherche une localisation en microscopie électronique. On peut aussi faire un tag-GFP. Promega a mis au point un autre tag dit HaloTag qui permet de réaliser le couplage avec un fluorochrome tout en gardant la cellule en vie.  [...] En première approche l'immunohisto est pas mal. Maintenant si cette protéine ne diffuse pas vous pouvez aussi faire de l'hybridation in situ des transcrits. Vous n'aurez pas la protéine proprement dite mais vous aurez le profil d'expression. L'intérêt est que vous pouvez toujours faire une hybridation in situ alors que vous êtes dépendant des anticorps pour l'immuno.  [...]

[Immunologie] expression et phosphorylation de la protéine

Je souhaite avoir une explication pour le faite d'avoir un marquage de ma protéine sous sa forme phosphorylée en immunohistochimie alors qu'au niveau de son expression protéique le marquage est négatif sur la même tumeur. J'explique ça par le spécificité de l'anticorps mais est ce qu'il y d'autres explications.  [...] Les conditions d'hybridation. en WB la protéine est dénaturée, pas forcément en IHC. Certains anticorps ne fonctionnent qu'en IHC.  [...]

[Biologie Moléculaire] Surface biotinylation

La biotine aussi connue sous le nom de vitamine H ou B8 est un coenzyme qui participe au métabolisme des acides gras, des glucides et des acides aminés et à la synthèse des vitamines B9 et B12.   [...] Le seul moment ou on peut utiliser la biotine lors d'un western est au moment de l'hybridation avec les anticorps. On incube les membranes avec un anticorps secondaire couplé à la biotine. La biotine ayant une affinité très forte avec la streptavidine ou l'avidité, on peut révéler le western avec une enzyme couplée à la streptavidine.  [...]