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[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse.  [...] Il a été montré qu'on pouvait précipiter l'ADN a temperature ambiante avec la meme efficacité qu'a -20°C. Cette croyance proviens du fait que l'ethanol deviens plus visqueux a basse temperature, mais ca n'a pas d'influence sur l'efficacité de précipitation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution d'ADN "contaminante"?

Pour MaliciaR. ADN visqueux = culot après précipitation à l'Ethanol mal resuspendu, ou présence d'ADN génomique (volontaire ou non.). Pour aider, il est possible d'incuber @ 50°C pendant 10min pour aider à la resuspension. Dans le cas d'ADN génomique, on peut soniquer (tout dépend des applications que l'on veut faire après, mais 10-30s suffit largement).  [...] Sinon, j'ai extrait mes ADN à partir de tissus animaux lysés 3h à 55° au bain-marie, puis phénol/chloroforme avec des tubes contenant un gel bloquant la phase P/chlo (très pratique) et Éthanol précipitation avant de reprendre mon culot dans de l'eau.  [...]

milieu de culture

Pour l'ADN plasmidique, pas de protéase. À la place, précipitation par saturation alcaline. Centrifugation, conservation du surnageant et élimination du culot. Enfin précipitation à l'éthanol.  [...] Merci et excusé moi si j'ai trop exagéré oui pour la croissance comme je vous es dit toute a l'heure j'ai mis une préculture en ISP4 liquide (2ml) laissé incubé a 30°C pendant 48h avec agitation et après la mettre dans un milieu ISP2 + 10% saccharose et incubé a 30°C pour 48h avec agitation.   [...]

Visualiser l'ADN

purification puis précipitation de l'ADN dans l'ethanol. L'ADN apparait ainsi comme une pelotte blanche.  [...] Voilà deja pas mal de méthodes, de la plus directe à la plus sophistiquée (l'electrophorèse n'est pas compliquée mais elle est moins spontannée que les autres).   [...]

inhibiteurs de la qPCR

Sachant que la qPCR sera utilisée pour quantifier le nombre de copies de gènes et que l'ADN génomique a été extrait par la méthode Salting out.  [...] C'est l'ADN génomique d'un insecte (une mouche gallifère ). L'extraction d'ADN avec le CTAB n' a pas marché donc j'ai suivi le protocole du salting out ( precipitation des débris cellulaires avec le NaCl et lavage avec l'ethanol absolu pus l'ethanol 70).  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour résumer. détruire les cellules (qui ont été lavées dans un tampon) à l'aide d'un détergeant (SDS trouvable dans le commerce), faire une première centrifugation courte pour faire descendre tout les débris cellulaires, prélever le surnageant (où il y a l'ADN et des protéines), puis faire précipiter l'ADN à l'aide d'Ethanol et d'acetate de sodium.  [...] Pour l'éthanol, au labo, on en a deux sortes. L'éthanol 100% classique (en fait 99%), que l'on utilise pour les tampons etc... Et l'éthanol ultra pure (99,999% certifié) pour les manips les plus précieuses (précipitation de l'ADN par exemple). Et je confirme que le méthanol est de moins en moins utilisé, à cause des coups de son élimination (toxique, donc pas dans l'évier.).  [...]

[Biochimie] Types d'éthanol

Je ne comprends pas déjà comment l'éthanol peut être 99,8% et contenir 3% d'éther sulfurique...Et ensuite je me demandais les applications possible de ce genre d'éthanol est-il suffisant pour de la biologie moléculaire (précipitation d'ADN) ou ne convient-il que pour décolorer des gels ou nettoyer des surfaces de travail.  [...] Alors le nettoyage des paillasses, c'est de l'éthanol à 70%, et pour précipiter mes ADN, j'utilisais de l'éthanol 99,8% et ça fonctionnait bien. D'ailleurs les fournisseurs l'indiquent souvent comme qualité biologie moléculaire ou pour biologie moléculaire, utiliser un produit pour le diluer à 70% je trouve ça un peu ruineux quand même.  [...]

[Biologie Moléculaire] c'est quoi le rôle du formamide

je fais du séquençage d'ADN. Après la purification, la réaction du séquençage, la précipitation à l'éthanol, on mélange avec du formamide. Ma question c'est. c'est quoi son rôle.  [...] mais selon ce document c'est plutôt le contraire. le formamide déstabilise l'ADN et favorise sa dénaturation. non son utilisation serait donc dans le but d'avoir de l'ADN simple brin prêt à être séquençé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

L'ADN est issu d'un broyat de foie de rat, il a été purifié par une exctraction phénolique, une précipitation dans de l'éthanol absolu et une resolubilisation dans un tampon d'élution TrisHCL 10mM + EDTA 1 mM à pH 8.  [...] C'est le premier TP où on prépare nous même de l'ADN, d'habitude il nous est donné tout prêt, donc une mauvaise manipulation est plus que probable en effet.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] En fait, il faut savoir que les ARN sont sensibles au pH alcalin et en général, l'extraction ADN se fait en phenol/Chloroforme/IAA à pH 8 et nous aurons l'ADN en phase aqueuse avec les ARN endommagés, ce qui ne gêne pas pour certaines analyses mais pas pour d'autres d'où l'action de RNase dans certains cas.  [...]