• Santé - Gamme, Copies, Plasmide, Tube

[Biologie Moléculaire] Encore de la Q-PCR : quantification absolue maintenant

Pour mes réalisations de Q-RT-PCR, ma gamme je la réalise avec un palsmide dont je connais la taille, la concentration... et bien sur dont je possède un couple de primers permettant d'amplifier un fragment de moins de 200pb de ce plasmide.  [...] A partir de là je fais une gamme dans laquelle je connais le nombre de copies de mon plasmide dans chaque tube. (100.000.000 copies, 10.000.000 copies, etc jusqu'à 1 copie).  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

Maintenant une différence de 2x, c'est significatif si c'est reproductible, que tu as bien tenu compte de l'efficacité d'amplification de tes amorces (gamme de dilution en cascade).  [...] IngDr a raison, tu peux vérifier tout ça avec un gène de ménage. Tu peux même le cloner dans un plasmide et ainsi déterminer un nombre de copies d'ADN par volume. Tu réalises ensuite une gamme et ainsi tu pourras poser des valeurs sur l'expression de ton gène grâce à la Q-PCR et ton gène de ménage.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

La Q PCR c'est établir une gamme étalon d'un ADN controle ( Quantité d'ADN au départ connu) généralement un plasmide avec 1000, 10 000 100 000 et enfin 1 000 000 copies et définir pour chaque quantitées le nombre de cycle néssaires pour avoir un signal différent du bruit de fond (le cT) celui-ci est donc inversement proportionnelle à la quantitée d'ADN du départ.  [...] Ton plasmide, comment est tu sur qu'il est à 1000 copies et pas 1500 ou 2000 copies. Dans ce cas tu es relatif à ton nombre de copies qui n'est pas si absolue que ca.  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

Souvent, les gammes sont faites avec des plasmides portant la cible. Comme tu connais exactement la séquence de ton plasmide, ou au moins son nombre de bases, tu peux calculer sa masse moléculaire, et de là, en déduire le nombre de copies de plasmide par mg d'ADN.  [...] Personnellement, je trouve que cette méthode a des limites. les plasmides sont si petits qu'il faut utiliser les concentrations très faibles d'ADN (fg). Dans ce cas, l'ADN a tendance au bout d'un moment à se coller aux parois des tubes en plastique (charges électrostatiques) dans lesquels tu stockes ta gamme.  [...]

qPCR résultats hors gamme standard!!!

pour l'instant, tu ne peux dire que tu as quelques copies mais pas beaucoup. moins de 1 copie /µL (c'est hors gamme = pas d'extrapolation). Est-ce que c'est grave de ne pas avoir un chiffre précis.  [...] Mon problème est que mon chef a fait une expérience avant que j'arrive à l'institut et il était super content de voir une amplification à 34 cycles alors que la gamme s'arrête à 33 cycles... moi je suis donc contre la quantification par le nb de copies... et vous.  [...]

Définition | Clonage | Futura Santé

Une fois que le gène d'intérêt a été isolé, il faut l'insérer dans un vecteur, qui peut être un plasmide bactérien. Souvent ces plasmides portent des gènes de résistance aux antibiotiques pour faciliter leur sélection. Le gène est inséré dans le plasmide et ce dernier est introduit dans une bactérie, comme Escherichia coli.  [...] Les bactéries portant le plasmide recombiné sont clonées. le clone bactérien portera un grand nombre de copies du gène d'intérêt porté par le plasmide.  [...]

plasmide centromerique

autant que je sache le plasmide centromérique se comporte comme un chromosome supplémentaire. Il sera ainsi répliqué dans la levure qu'une fois par cycle cellulaire. C'est donc un plasmide monocopie.  [...] C'est tout à fait ca, je rajouterai juste que le plasmide à haut nombre de copies 2microns, est un plasmide naturel puisque isolé de S. cerevisiae.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gamme étalon de plasmide qPCR en temps réel

En stage de M2 microbiologie je travaille sur Adénovirus. Je cherche à quantifier l'augmentation de génome de ces derniers dans divers échantillons par qPCR en temps réel. Pour se faire, j'utilise une gamme étalon faite à partir d'un plasmide pEX-A2 avec l'insertion du gène d'intérêt.  [...] Ensuite, pour produire ma gamme étalon, j'ai calculé la concentration en nombre de copies/µL, j'obtenais environ 7 x 10^12 cg/µL puis j'ai dilué en cascade pour obtenir une gamme allant de 1 x 10^7 a 1 cg/µL. J'ai effectué une qPCR dans la foulée pour tester la gamme et je pouvais détecter les échantillons allant jusqu'à 10 cg/µL.  [...]

[Biologie Moléculaire] L'ADN plasmidique

Salut,afin d'extraire l'ADN PLASMIDIQUE un groupe de travail a inoculé 5ml de bouillon LB à partir d'une colonie isolée sur milieu gélosé ils ont incubé ce bouillon une nuit à37°C.  [...] L'incubation toute la nuit permet d'amplifier le nombre de copies du plasmide (le plasmide se réplique dans les cellules et les cellules se divisent).  [...]

[Génétique] Questions Materials & Methods...

un plasmide centromerique est un plasmide a bas nombre de copie car il possede un centromere. Il y en a de une a 3 copies dans une levure.  [...] Il y a deux types de plasmides chez la levure. Ceux qui ont des origines 2microns qui sont des plasmides multicopie (100a 300 copies par noyaux). et les plasmides qui ont une origine ARS/CEN qui sont present en une ou 3 copies par noyaux en raison de la présence d'un centromere sur le plasmide.  [...]