• Santé - Fret, Transfert, énergie

Définition | Microscope en fluorescence | Futura Santé

La fluorescence est la propriété que certains corps ou molécules ont à émettre une lumière après avoir été excités avec une lumière d' énergie supérieure. Ainsi, un objet excité par une longueur d'onde émettra une fluorescence à une longueur d'onde supérieure.  [...] FRET ou transfert d'énergie entre molécules fluorescentes permet de visualiser si deux molécules interagissent.  [...]

Test ELISA ??

Bonjour, à tous. J'ai vu un test pour tester l'action pharmacologique de medicament sur des recepteurs qui serait apparenté à un test ELISA. La technique consiste à fixer les cellules sur des palques multipuits, cellules ayant été transfectés exprimant des recepteurs tagés.  [...] D'autres techniques existent. si le récepteur est effectivement taggé, suivant les propriété de ce marquage, il est possible lorsqu'il y a interaction avec l'anticorps secondaire via le primaire, d'exciter le marqueur du récepteur qui réémet de l'énergie vers l'anticorps II, lui-même couplé à un fluorophore.  [...]

PCR en temps réel

puis il ya la pcr qui utilise 2 sondes appelées d'hybridation l'une porte un fluorochrome donneur et l'autre un fluorochrome accepteur. quand elles sont cote à cote le donneur transmet son énergie d'exitation à l'accepteur qui émet de la fluorescence. et ma question est de savoir si ces 2 sondes sont également hydrolysées par la taq car apparament d'apres ce que j'ai lu ce n'est pas le cas et je comprend pas pourquoi.  [...] Il y'a en effet la méthode FRET (fluorescence resonance energie transfert ) c'est la méthode que j'ai utilisé lors de mon propre stage.  [...]

[Biotechnologie] Pourquoi utiliser un FRET pour la détection d'une protéine

Le FRET ou Fluorescence Resonance Energy Transfert est un mécanisme physique qui est très appréciée en biologie. Pour faire simple, si tu excites un fluorophore avec la longueur d'onde adaptée (appelée A), il émettra en retour une autre longueur d'onde spécifique qu'on appelera B.  [...] Le FRET décrit le transfert de l'énergie du premier fluorophore à un second dans le cas où ils sont très très proches. Ainsi en émettant A, l'énergie qui devait permettre B est transférée au 2d fluorophore qui émettra alors C.  [...]

Marquage GFP et autres couleurs

Bonjour cette technique s'appelle le FRET Fluorescence Resonance Energy Transfert. On utilise effectivement des fluorophores dont les spectres d'émission pour l'un et d'excitation pour l'autre se recouvrent.  [...] Mais attention cette technique repose sur un transfert d'énergie par résonnace des orbitale moléculaire des molécules et pas par fluorescence du donneur.  [...]

GFP et mcherry

1) Si je comprends bien on utilise les gènes qui codent pour la GFP et la mcherry, qui seront insérés (liés au promoteur) dans un transgène, quand ceux ci seront traduits en protéines il y aura fluorescence et donc on pourra détecter si il y a eu expression de notre gène d'intérêt.. Ai je bien compris.   [...] Les couples de fluorophores comme GFP-mcherry (ou CFP-YFP par exemple), sont habituellement introduits pour faire des expériences de FRET(=transfert de fluorescence. Plus d'info ici. http.//fr.wikipedia.org/wiki/Transfe..._fluorescentes ). Ils permettent en général de voir si deux protéines (ou les deux domaines d'une meme protéine) sont proches ou non dans l'espace.  [...]

Terme en français pour "harvester fluorophore"

Lorsque la sonde n'est pas liée à l'ADN, le quencher bloque l'émission de la fluorescence (proximité des 2 extrémités). Lorsque la sonde se lie à l'ADN sb, les extrémités 5' et 3' s'éloignent, entrainant l'arrêt de l'inhibition. le fluorochrome receveur est excité par la lumière et transmet son énergie par FRET au fluorophore accepteur qui émet de la fluorescence dans une couleur spécifique (autre que celle du receveur).  [...] En fait les fluorochromes sont tous accepteurs et émetteurs d'énergie. Ils ont un spectre spécifique d'absorption et d'émission. Dans le cas d'un quencher, la lumière émise est soit hors du spectre visible, soit dans une longueur d'onde que ton appareil ne capte pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Combien d'enzymes différentes dans le vivant ?

- Fluorescent methods. fluorescence resonance energy transfer (FRET), fluorescence correlation spectroscopy (FCS), total internal reflection fluorescence (TIRF).  [...] Pour rappel, la diastase a été la première enzyme découverte. Elle a été identifiée par Jean-François Persoz et Anselme Payen, travaillant dans une usine française de sucre, où l'enzyme a été extraite d'une solution de malt en 1833.   [...]

FRET rapport GFP/mCherry

j'ai une petite question... je ne comprends pas ce que signifie le rapport entre deux fluorophores comme la GFP et la mCherry.. Pourquoi ne pas mesurer l'intensité de la GF seule.   [...] parce que ça ne renseigne pas sur la proximité entre deux protéines, ce que fait le FRET. http.//fr.wikipedia.org/wiki/Transfe..._fluorescentes.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 30

Bonjour, moi je pense qu'il n'y a qu'une couleur et que le bleu représente une faible intensité de fluo. La prot à trouver est alors présente dans une grande partie du noyau, à certain endroits de façon trés dense et à d'autre presque absente. Vu la cinétique de récupération de fluo je ne pense pas qu'il s'agisse d'histones qui était ma premiere idée. Mais la je sèche, je n'ai pas trop d'idées.   [...] HP1 est une protéine qui se trouve préférentiellement au niveau de l'hétérochromatine et qui se fixe sur les mH3K9 grâce à son chromodomaine. Une fois fixée, elle recrute une autre protéine (Suv39h) qui est une histone méthyltransférase. La méthylation du résidu K9 de l'histone H3 va attirer de nouveau HP1 qui va attirer de nouveau Suv39h etc.  [...]