• Santé - Fragments, Sites, Restriction

[Biologie Moléculaire] polymorphisme/mutation???

Les SNP et RFLP, mais également mini- et micro-satellites sont des mutations touchant un nombre très restreint de nucléotides, entrainant donc les polymorphismes.   [...] Les RFLP (Restriction Fragments Lenth polymorphism) sont des SNP particuliers. Ils touchent des sites d'enzymes de restriction.  [...]

Technique : RFLP

tu as dis précédemment que l'adn était coupé en point x (car site de restriction) et cela donnait des fragments. Soit, mets tu dis que s'il y a absence de ce site alors il y a migration de fragments plus courts ce ne serait pas le contraire par hasard, car si présence de site de restriction alors ca coupe donc longueur moindre que s'il n'y avait pas de site.  [...] je pense comme toi, s'il y a présence de sites de restriction, les fragments obtenus seront plus courts que si les sites sont absents, puisque s'il n'y a aucun site de restriction spécifique à l'enzyme de restriction, le fragment reste entier et donc sa longueur est maximale.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

Le nombre de fragments dépend du nombre de site de restriction qu'il y a sur ton plasmide. S'il y a deux sites, tu auras 2 fragments linéaires, 3 sites 3 fragments etc. Le truc c'est que tu auras forcément un mélange des formes non digérées et des formes digérées (voir des formes partiellement digérées).  [...] La carte circulaire comme tu dis (= la carte de restriction) se fait après l'électrophorèse. Tu ne peux pas prédire le nombre de fragments que tu auras (à part si tu connais la séquence complète de ton plasmide).  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

Ces derniers jours, j'étudie les empreintes génétiques, notamment le polymorphisme de l'ADN, les SNP et les séquences répétées en tandem. Je souhaite parler du polymorphisme de longueur des fragments de restriction, mais j'ai beau faire des recherches, je ne comprends absolument pas de quoi il s'agit.  [...] Après de nombreuses recherches, voilà ce que j'ai compris. les enzymes de restriction ont la faculté de couper la molécule d'ADN à des endroits spécifiques. Par exemple, une enzyme va couper entre G et A, c'est le site de restriction. Si on prend deux fragments de molécule d'ADN de deux individus différents.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je mal à comprendre comment peut on jouer sur les séquences, et faut il toujours commancer par le triple ATG des amorces pour faire la PCR et la place de la PCR dans la vérification de l'intégrité des plasmides.   [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]

Carte de restriction de Pcr-GAI

Le problème suivant est de placer les sites de restrictions sur le GAI. imaginons que l'on a 2 fragments sur la moitié 5', un de 200pdb et l'autre de 545pdb (l'addition fait 745 soit la moitié 5') on a un site de restriction mais comment le placer Car on peut partir de 5' vers 3' ou de 3' vers 5'.  [...] J'ai peut être oublié de préciser que je n'ai jamais établi de carte de restriction ^^'. En fait je ne vois pas du tout comment placer les sites de restriction rien qu'en regardant une électrophorèse...Car finalement on aura des fragments de différentes tailles à mettre bout à bout mais dans quel sens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Beta galactosidase chez Saccharomyces cerevisiae

Autre question à l'épreuve des balles. t'es certain que ton gene beta gal est bien intégré et qu'il est en phase Pas une petite délétion due aux enzymes de restriction durant le clonage.  [...] Là même chose, j'ai réalisé ma construction de telle sorte à ce que mes fragments peptide promoteur, peptide signal et beta gal soient en phase, j'utilise pour celà des sites de restriction bien sûr, mais j'ai vérifier avant de faire mon clonage.  [...]

[Biochimie] Mapping et Bal 31

This degradation is accomplished without the introduction of detectable scissions away from the ends of the duplexes. When this nuclease is used to produce a series of progressively shortened samples from a linear duplex DNA, subsequent digestion of these samples with a site-specific restriction endonuclease and analysis of the resulting fragments by gel electrophoresis permits the rapid establishment of the order of the restriction enzyme fragments through the entire genome.  [...] This is accomplished by noting from the electropherograms the order in which the various restriction enzyme fragments become noticeably shortened or disappear. Using this method, the five cleavage sites for the endonuclease Hpa I and the single cleavage sites for the nucleases Hpa II and Pst I have been mapped in PM2 bacteriophage DNA.  [...]

Plasmide recombinant

c'est beau essayé de comprendre en lisant et relisant le cours et la correction mais il y apparemment un truc qui m'échappe, donc votre aide sera la bienvenue.   [...] Après ligation de ton plasmide, si tu le redigères, les fragments générés ne sont plus les mêmes qu'au départ. Tu as perdu un bout de plasmide, celui qui se trouvait entre les deux sites de restriction utilisés à la base, et ça a été remplacé par ton insert.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Tout a fait, si tu as une carte de restriction tu peux couper a la base pres. Il faut juste avoir un site bien placé. Comme ça tu peux supprimer la fin de ton ADNc et le rabouter a ton autre gène, sous réserve de sites de restrictions bien placés sur l'un et l'autre des fragments et qui permettent un assemblage en phase.  [...] Je ne sais pas quel vecteur tu veux utiliser, mais il existe des centaines de vecteurs commerciaux qui comportent tout ce qu'il faut, dont un MCS ( multi cloning site ) entre le promoteur et le terminateur. Ce site contient une grande quantité de sites de restriction et permet d'insérer facilement ce que tu veux. (voir image).  [...]