• Santé - Fragments, Restriction, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Une fois ta PCR faite, tu digères tes fragments avec les 2 enzymes et pareils avec ton plasmide. Quand tu choisis tes sites il faut que tu vérifies l'ordre dans lequel les sites de restriction sont présents sur le plasmide. Dans notre cas, il faut que EcoR1 soit avant HindIII et le tout après le promoteur déjà présent sur le plasmide (sinon ton insertion se fera à l envers). Donc il faut que ton plasmide ait.  [...] fin de ta sequence-HindIII-NNNN), ceux ci désignent des bases qui peuvent éventuellement séparés les 2 sites de restriction sur ton plasmide qui ne sont pas forcément côte à côte.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Ensuite nous déposons les digestions réalisées sur un gel d'electrophorese, puis nous preparons un marqueur de taille et egalement un plasmide natif mais non digéré qui contient 2µL du plasmide, 8µL d'eau stérile et 1µL de tampon de depot.  [...] oui tu peux, sous certaines conditions. Il faut un site de restriction dans le vecteur, et un autre dans l'insert (pas au milieu de l'insert). Selon que l'insert est dans un sens ou dans l'autre, tu auras deux fragments différents en taille. Pour l'histoire du plasmide natif j'aurais dit que c'etait le vecteur seul.  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Un chercheur dispose d'un vecteur de clonage, le plasmide pLLAGRE, dont il cherhe à déterminer la carte. Pour ce faire, il réalise des digestions à l'aide des enzymes de restriction Hind3 et BsP1 et obtient les fragments suivants.  [...] La première partie du devoir vise à vous faire trouver la taille du plasmide. D'où proviennent les fragments générés par la digestion enzymatique Pensez vous que le plasmide puisse faire 5807 pb alors que la digestion par BspI génère un fragment de cette parmis d'autres.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

- pourquoi n'avons nous pas obtenu les meme bandes, lorsque le plasmide n'a pas été soumit a une restriction (piste 1 et 4) alors que les conditions été iden,tiques et le plasmide censé etre le meme.  [...] ou bien vu que l'echantillon 4 ne semble exister qu'en forme linéaire, il est possible qu'avec PvuII, il n'y ai pas de coupure (si la coupure pour donner la forme linéaire a été faite au niveau du site de restriction que reconnait PvuII), ou alors 2 fragments et donc 2 bandes qui migrent plus loin que la simple forme linéaire du plasmide.  [...]

[Microbiologie] Analyse plasmidique

Je ne comprends pas comment conclure, lorsqu'on obtient plusieurs fragments de taille différentes à l'électrophorèse, qu'il s'agit bien de fragments différents et non du même fragment dans une configuration différente (forme linéaire, surenroulée..).  [...] Lorsqu'on observe des fragments de plasmide sur gel, cela veut dire la plupart du temps qu'on l'a clivé avec des enzymes de restriction. Il n'y a que la forme circulaire du plasmide qui peut être sous forme surenroulée, mais les formes linéaires le restent.  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

pour les canals 2 3 et 4 j'ai compris que puisqu'il n'y a qu'un site de restriction, le plasmide est ouvert à un endroit et le fragment est toujours de même taille. Mais je ne comprends pas ce qu'il en est du canal 1, le plasmide est pas digéré et on a plein de fragments de tailles différentes.  [...] mais dans ce cas, si je fais agir une enzyme de restriction qui n'a qu'un site de restriction sur le plasmide il faut que la digestion soit complète pour que je n'obtienne que des fragements de même taille et même volume.  [...]

Carte de restriction

Idem avec le plasmide B pour générer les 3 fragments, en supposant qu'on utilise la même enzyme de restriction pour les 2 plasmides Où se situe le site de restriction surnuméraire et à quoi cela correspond-il concernant la mutation.  [...] Qu'est-ce qu'une carte de restriction Reportez les résultats sous forme linéaire en indiquant les sites de restriction pour le plasmide A et B.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

2- le même plasmide est soumis a une irradiation aux rayon UV puis digéré dans les mêmes par SamI. on obtient alors 1 fragment d'environ 7900pb et 1 fragment d'environ 1500 pb. Que s'est-il passé.  [...] C'est quoi les conditions expérimentales Dans tous les cas, si on agit sur un plasmide, il faut deux sites de restriction pour obtenir deux fragments. Les plasmides soumis aux UV, ils sont digérés juste après Pour les effets de l'irradiation, je ne vois que la formation de dimères de pyrimidine ou de cassure(s).  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

* Dans l'analyse par électrophorèse, tu vois des choses différentes en fonction de la conformation de ton ADN. Ainsi, dans le cas simple où on utilise de l'ADN linéaire (ton plasmide en morceaux après la digestion par les enzymes de restriction), plus c'est bas, plus c'est petit.  [...] En fait, on a fait notre electrophorese sur plusieurs especes de E.coli, HRPN PGAG PCK3 et PLTR avec ECOR1 et HINDIII, une autre chose que je n'ai pas comprise, c'est. Est ce que c'est enzymes de restriction vont séparer les plasmides avec le même nombre de fragments A priori non.  [...]

Expériences en génétique…

Il n'y a pas besoin de connaitre la taille du gène (d'ailleur tu fais migrer de l'ADN ou de l'ARN et pas forcément un gène) car tu fais migrer un marqueur de taille à coté. On utilise l'électrophorèse par exemple pour contrôler les manips que l'on fait. Par exemple si tu veux voir si un gène que tu as voulu insérer est bien présent dans un plasmide, tu peux faire une restriction en coupant dans le gène hypothètique et tu calcules la taille des fragments obtenus en supposant que ton gène est présent.  [...] J'ai donc un peu repondu de travers à la question en expliquant comment recuperer un gène introduit dans une bactérie grace à un plasmide. Dans ce cas là, comme on connait le plasmide, il n'y a pas à chercher à identifier le gène. On connait la taille du fragment de restriction, c'est tres simple.  [...]