• Santé - Fragments, Restriction, ADN

[Biologie Moléculaire] marqueurs moleculaires

Alors dire polymorphisme RFLP c'est redondant car dans RFLP il ya déjà écrit polymorphisme (Restriction fragment length polymorphism=Polymorphisme de longueur des fragments de restriction).  [...] De l'ADN est coupé en fragments par une enzyme de restriction, cette dernière coupant l'ADN au niveau d'une séquence qui lui est spécifique (site de restriction). Les fragments d'ADN ainsi obtenus, nommés fragments de restriction, sont ensuite séparés selon leur longueur par électrophorèse sur gel d'agarose, on obtient un profil.  [...]

Extraction d'ADN

Notre laboratoire travaille entre autre sur de l'extraction d'ADN issu de valves cardiaques de patients. Nous utilisons pour ca le kit Qiagen (attention, il existe des kits d'extraction d'ARN et d'ADN). Je crois ne pas me tromper en disant qu'il existe plusieurs kit pour l'ADN.  [...] La technique pour l'isolement rapide d'ADN mitochondrial (mt ADN) à partir de cellules d'animaux, est basée sur le procédé sélectif de dénaturation alcaline de BIRNHOIM et DOLY et évite l'utilisation de la centrifugation en gradient de densité dans le CsCl.  [...]

Carte de restriction ( génétique)

Un ADN est digéré par trois enzymes (EcoRI, PstI, SmaI) afin de réaliser une carte de restriction. Après électrophorèse sur gel d'agarose, les résultats obtenus sont les suivants*(taille des fragments observés).  [...] Déterminer la carte de restriction de cet ADN en expliquant clairement et précisément vos choix. Chacun des trois enzymes utilisés reconnaît une séquence spécifique et distincte des deux autres.  [...]

Remise en cause de la localisation du berceau de l'humanité

Afin de vérifier cette hypothèse, l'équipe du Dr. Erika Hagelberg de l'Université d'Oslo a analysé l' ADN mitochondrial, le polymorphisme de fragments de restriction ainsi qu'un marqueur du chromosome Y des Andamanis de différentes îles et des habitants des îles Nicobar.  [...] La conclusion de leur étude est que les Andamanis ont une proximité génétique plus grande avec les peuples Asiatiques qu'avec les peuples Africains, confirmant leur hypothèse de départ. Ils descendraient donc de colons du Sud Est de l'Asie de l'ère Néolithique.   [...]

Marche sur le chromosome

marche sur le chromosome Stratégie pour la cartographie et le séquençage d'un fragment d'ADN ainsi que pour le clonage positionnel. De grands fragments de restriction (ou clones de BAC) sont générés et, après criblage, un point de départ unique est identifié.  [...] La premiere étape consiste a fabriquer une banque de fragment d'ADN genomique sur lequel va etre fixé un adaptateur. Ensuite il suffit de faire une PCR en utilisant une amorce spécifique du fragment d'ADN que tu connai et une amorce spécifique de l'adapatateur.  [...]

[Biochimie] génétique - endonucléases de restriction

Un ADN génomique contenant 40% de guanine est hydrolysé par une enzyme de restriction reconnaissant le palindrome AATT. Quelle est la taille moyenne des fragments générés par l'hydrolyse enzymatique.  [...] Donc la probabilité de trouver un site est (1/4) n avec n la taille du site de restriction. Ce genre de calcul vous amène à conclure qu'une enzyme telle que EcoRI génère des fragments de 4096 pb en moyenne.  [...]

[Biologie Moléculaire] La génomique structurale !

(Donc, une détermination de distance entre les gènes, colange du génome... ou est le gène qui nous intéresse dans tous ça. JE N'ARRIVE PAS A FAIRE LE LIEN ENTRE LA CARTE PHYSIQUE, GENETIQUE, RESTRICTION ET LA GENOMIQUE STRUCTURALE.).  [...] Ils ont donc coupé, puis cloné chaque fragments de l'ADN humain (en usant à la fois d'enzyme de restriction et de séquences chevauchantes) dans des vecteurs d'expression standardisé, qu'ils ont fait séquencé (si je me souviens bien, à l'époque, il fallait faire une 20 de run -pas sur du chiffre, si quelqu'un peut confirmer- pour être un peu près sûr du séquençage des 500 premières paires de bases).  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

Des digestions avec une ou 2 enzymes sont réalisées, les produits de la digestion sont soumis à une électrophorèse. On dtermine pour chaque puits le nombre et la taille des fragments de restriction par comparaison avec la migration de fragments d'ADN de taille connue. Les résultats sont dans le tableau suivant.  [...] Ok, cela n'aide pas vraiment, dis comme cela, mais lorsque je devais faire une carte de restriction, le plus dur est de la commencer. Une fois que tu as les deux premiers sites, cela devient généralement plus facile. Je te conseille donc de tracer un cercle, placer le site EcoRI, puis son copain, BamHI.  [...]

[Génétique] AFLP Amplified Fragment-Length Polymorphism

J'essaye de comprendre cette technique (AFLP) et d'après ce que j'ai lu. l'ADN génomique est digéré par deux enzymes. Des adaptateurs sont ajoutés aux extrémités des sites de restriction. Les amorces peuvent ensuite se fixer sur les fragments obtenus et ceux-ci sont amplifiés.  [...] La PCR peut être réalisée en plusieurs étapes. une première avec des amorces dont la séquence est identique à celle des adaptateurs et qui amplifie ainsi tous les fragments. la seconde avec des amorces possédant de 1 à 3 nucléotides supplémentaires en 3' sélectionnant ainsi un plus petit nombre de fragments étant donné que ceux ci peuvent être très nombreux.  [...]

[Génétique] taille moyenne fragments de restriction

Je bloque sur une question où l'on me demande de calculer la taille moyenne des fragments de restriction après digestion par ecoR1 (site reconnaissance. GAATTC) de l'adn humain.  [...] Après ça il ne te reste plus qu'a multiplier la fréquence d'apparition de GAATTC par le nombre de paire de bases dans le génome humain pour avoir le nombre de sites théoriques EcoRI dans notre génome. Et vu que tu désires avoir la taille moyenne des fragments, tu n'as plus qu'a diviser la taille du génome par le nombre de séquences EcoRI.  [...]