• Santé - Fragments, Enzymes, Restriction

Mémoire en génétique : questions diverses

Ces derniers jours, j'étudie les empreintes génétiques, notamment le polymorphisme de l'ADN, les SNP et les séquences répétées en tandem. Je souhaite parler du polymorphisme de longueur des fragments de restriction, mais j'ai beau faire des recherches, je ne comprends absolument pas de quoi il s'agit.  [...] Après de nombreuses recherches, voilà ce que j'ai compris. les enzymes de restriction ont la faculté de couper la molécule d'ADN à des endroits spécifiques. Par exemple, une enzyme va couper entre G et A, c'est le site de restriction. Si on prend deux fragments de molécule d'ADN de deux individus différents.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

En fait, on a fait notre electrophorese sur plusieurs especes de E.coli, HRPN PGAG PCK3 et PLTR avec ECOR1 et HINDIII, une autre chose que je n'ai pas comprise, c'est. Est ce que c'est enzymes de restriction vont séparer les plasmides avec le même nombre de fragments A priori non.  [...] Le nombre de fragments dépend du nombre de site de restriction qu'il y a sur ton plasmide. S'il y a deux sites, tu auras 2 fragments linéaires, 3 sites 3 fragments etc. Le truc c'est que tu auras forcément un mélange des formes non digérées et des formes digérées (voir des formes partiellement digérées).  [...]

[Biologie Moléculaire] polymorphisme/mutation???

Les SNP et RFLP, mais également mini- et micro-satellites sont des mutations touchant un nombre très restreint de nucléotides, entrainant donc les polymorphismes.   [...] Les RFLP (Restriction Fragments Lenth polymorphism) sont des SNP particuliers. Ils touchent des sites d'enzymes de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] activite enzymes de restrictions

afin de réaliser une banque de fragments d'ADNg double brin, on dispose de 20 µg d'ADNg que l'on digère par les enzymes de restrictions BaeGl ou Alul. Chacune de ces enzymes possède une activité de 10U/µL (1U coupe totalement 1µg de plasmide de 3000pb possèdant un site unique de restriction pour l'enzyme de restriction considéré en 1h à 37°C).  [...] 1) si la présence de site de restriction est aléatoire, expliquer en détaillant les calculs, combien de site de restrictions sont théoriquement présent sur ces 20µg d'ADN pour chacune de ces enzymes.  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Un chercheur dispose d'un vecteur de clonage, le plasmide pLLAGRE, dont il cherhe à déterminer la carte. Pour ce faire, il réalise des digestions à l'aide des enzymes de restriction Hind3 et BsP1 et obtient les fragments suivants.  [...] La première partie du devoir vise à vous faire trouver la taille du plasmide. D'où proviennent les fragments générés par la digestion enzymatique Pensez vous que le plasmide puisse faire 5807 pb alors que la digestion par BspI génère un fragment de cette parmis d'autres.  [...]

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

Les enzymes de restriction vont découper l'ADN en fragment, et en fait sur l'ADN il y a des sites de restriction spécifiques pour plusieurs enzymes.  [...] Et le nombre et la taille des fragments d'ADN obtenus avec une enzymes de restriction dépendent du nombre de fois où la séquence reconnue par l'enzyme est répétée au sein de la molécule d'ADN. Et donc le choix d'une enzyme de restriction dépend de la taille des fragments que l'on désire.  [...]

Enzyme compatible, non compatible

- On dispose de 2 enzymes de restriction compatibles lorsqu'elles produisent des fragments de restriction qui peuvent s'associer par complémentarité des bases si ce sont des extrémité cohésives, mais qu'en est t'il lorsque ce sont des extrémités franches.  [...] - En rapport avec le plasmide. pourquoi est ce que l'on utilise pas la meme enzyme de restriction dans la bactérie pour créer la meme coupure et ainsi faciliter l'insertion du fragment de restriction Pourquoi en utiliser 2 bien qu'elles soient compatibles.  [...]

Purification Séphacryl S-400

Sephacryl S-400 High Resolution to separate polysaccharides, macromolecules with extended structures and even small particles such as plasmids. (fractionation range globular proteins 2 × 104–8 × 106).   [...] J'aurais voulu savoir si le séphacryl S-400 permettait d'éliminer efficacement la Taq pol, car actuellement je voudrais faire du clonage par restriction/ligation. Je sais que la taq pol peut être gênante après digestion des fragments PCR par des enzymes de restriction, puisque les résidus de Taq pol viendraient potentiellement compléter les extrémités collantes.  [...]

Carte de restriction ( génétique)

Un ADN est digéré par trois enzymes (EcoRI, PstI, SmaI) afin de réaliser une carte de restriction. Après électrophorèse sur gel d'agarose, les résultats obtenus sont les suivants*(taille des fragments observés).  [...] Déterminer la carte de restriction de cet ADN en expliquant clairement et précisément vos choix. Chacun des trois enzymes utilisés reconnaît une séquence spécifique et distincte des deux autres.  [...]

biochimie

Une même quantité de DNA double brin d'un virus est complètement hydrolysée par différentes enzymes de restriction utilisées seules (digestions simples) ou conjointement (digestions doubles). Après séparation par électrophorèse en gel d'agarose, la taille des fragments générés est estimée (tableau ci dessous).  [...] C) Donner, en justifiant, la structure de ce fragment de DNA double brin sachant que la séquence ci-dessus appartenait à un DNA double brin obtenu lors de l'attaque de l'extrémité d'un DNA linéaire par l'enzyme de restriction BbvI qui reconnaît le site.  [...]