• Santé - Fragments, ADN, Analyses, Hybrides, Sondes

[Génétique] polymophisme(probleme)

salut les amis j éspére que vous allez bien,voilà j ai un sérieux probleme,je suis en période de controles et j ai besoin de vous.   [...] en polymorphisme génétique,la détection d un polymorphisme peut se faire avec RFLP bi-allélique, et le prof a parlé de sites polymorphes internes/sites polymorphes externes se trouvant sur les fragments d ADN analysés et hybridés à des sondes.que signifie ces deux expressions.  [...]

CGHarray Anomalie en mosaïque

Une mosaïque n'est pas une anomalie déséquilibrée. On parle d'anomalie déséquilibrée lorsque il y a un gain ou une perte de fragment à l'échelle du génome. Donc une translocation par exemple, n'est pas concernée puisque le fragment qui transloque est toujours présent en deux exemplaires, à l'échelle de la cellule.  [...] En revanche, une délétion ou une duplication sont des anomalies déséquilibrées. Puisque l'ADN est fragmenté avant d'hybrider sur puce de CGH, le logiciel d'analyse ne peut pas savoir de quel chromosome proviennent réellement les fragments hybridés, alors il les représente à leur localisation normale.  [...]

Isoler une région d'un génome à partir d'un BAC

Pour vérifier tu peux également utiliser les hybrides d'irradiation dans les cellules CHO. tu fragment ton ADN avec des doses d'UV variables. Ensuite tu récupères les fragments et tu les mets dans des cellules CHO pour qu'il y ai recombinaison et pour obtenir des clones cellules CHO contenant des fragments venant de ton génome fragmenté.  [...] Plus la dose d'irradiation est forte et plus tu as des chances de séparer 2 fragments proches sur ton génome. Donc si tu retrouve par exemple 2 séquences hybridée toujours l'une à coté de l'autre dans tes cellules CHO et ce, même avec de fortes doses d'irradiation aux UV, c'est qu'il y a de fortes chances pour que tes séquences soient cote à cote dans ton gènome initial.  [...]

[Biologie Moléculaire] puce à ADN

en ce qui concerne les puce à ADN, j'aimerai bien comprendre de manière simplifier comment peut on détecter les hybrides formés entre les sondes fixées et les produits de la PCR et c'est quoi l'histoire du scanner.  [...] Les 2 sont hybridés en même temps sur la puce, si pour un spot donné le signal de fluo est orange (il y a des valeurs numériques pour ça) c'est qu'il y a autant de ce gène dans ton contrôle que dans l'échantillon étudié, s'il est vert c'est qu'il est sous exprimé dans ton échantillon par rapport au contrôle, s'il est rouge c'est qu'il est sur exprimé dans ton échantillon par rapport au contrôle.  [...]

Marche sur le chromosome

De nouvelles sondes complémentaires à des séquences du même fragment mais adjacentes au point de départ (clone BAC) sont synthétisées et ensuite utilisées pour identifier de nouveaux fragments de restriction chevauchant le point de départ initial. Le procédé est répété, en s'éloignant progressivement du point de départ.  [...] disons, lors de cette technique on utilise une sonde et cette sonde peut tomber sur l'ADN répété et comme on a des clones qui sont hybridés et hybridés entre eux dans d'autres endroits.Cela va probablement couper la marche.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse.  [...] Tu as ton ARN, tu lui hybrides une amorce ADN (qui peut-être une sonde marquée visualisable sur Northern Blot) et à l'aide d'une ADN polymérase ARN dépendante, tu produis un ADN complémentaire de cet ARN. Donc oui tu peux appeler ça une réaction de transcription inverse je pense.  [...]

[Biologie Moléculaire] les puces à ADN

On mélange les deux types d'ADNc dans des proportions égales et on les dispose dans chaque puits du microarray. Ils s'hybrident alors (ou pas) avec les oligonucléotides du puits, lui donnant une couleur allant du rouge au vert qui sera représentative des fragments hybridés.  [...] On peut avoir un intérêt particulier à détecter des puits hybrides, pour une raison X ou Y (que je ne saurai vous donner là spontanément ^^). Donc tout dépend de ce qu'on souhaite étudier. oui, dans certains cas ça serait mieux d'avoir rouge ou vert et pas d'intermédiaire, mais bon ^^ Puis c'est une chose fréquente d'avoir des éléments du transcriptome commun entre une cellule normale et cancéreuse (au final, il reste toujours des similitudes malgré tout ^^).  [...]

[Biologie Moléculaire] Adn...

Si deux brins presque complémentaires (juste une petite fraction de leur séquence ne remplit pas cette condition de complémentarité), le réappariement se fera également mais dans des conditions un peu moins strictes. L'appariemment entre deux brins qui ne proviennent pas de la même double hélice est l'hybridation entre ADN différents.  [...] Les hybridations ADN-ADN étaient une technique qui faisaient fureur dans les années 70-80 pour distinguer les espèces bactériennes. On prenait l'ADN de 2 bactéries et on essayait d'apparier les brins ensemble pour voir si elles étaient de la même espèce ou non, et si l'hybridation était imparfaite on étudiat les différences selon leur % d'hybridation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contruction d'un fragment d'ADN à partir de produits PCR

mais j'ai un doute. je me demandais si je pouvais liguer mes trois fragments en même temps sans passer par une étape de clonage, c'est à dire que la ligation ne se fasse pas par un vecteur.  [...] Je mettrais mes tubes a chauffer dans un container (a 95C, mini 1/2L) puis je mettrais le container dans la chambre froide toute la nuit (ou jusqu'a ce que le container soit froid). Ensuite tu peux faire un round a 75C pour la premiere elongation. Un refroidissement lent va permettre une bien meilleure hybridation des fragments, surtout si ceux ci ne se chevauchent que de 20pb.  [...]

ADN-Cytosol

Chez les procaryotes l'ADN se balade dans la cellule puisqu'il n'y a pas de noyau, on a aussi les plasmides chez les bactéries (ADN qui codent pour des fonctions souvent non-vitales pour l'individu mais qui apportent des avantages sélectifs à l'hôte).  [...] D'ailleurs, si je me souviens bien, il y a des protéines cellulaire qui patrouille dans le cytosol pour détecter tout ADN (et le détruire) ainsi que les hybrides ADN/ARN.  [...]