• Santé - Fragment, Plasmide, Sens

[Biologie Moléculaire] perte spontanée d'insert lors du clonage

- plasmide sensé avoir inseré mon fragment dans le bon sens (ce qui est en réalité après vérification par pcr et par digestion ne contenant pas du tout mon insert) = entre 10 et 20kb.  [...] -plasmide sensé avoir inseré mon fragment dans le bon sens et digéré avec sacI lors de la vérification = toujour entre 10 et 20kb mais un peu derrière du même plasmide non digéré (ceci est valable pour toutes les 4 clones).  [...]

génie génétique

On peut choisir de fabriquer un fragment dont chaque extrémité présente un site de restriction différents ET qui sont aussi sur le plasmide, comme ça le fragment ne pourra s'insérer que dans un sens qui est celui sur le plasmide de clonage. ok.  [...] donc en gros l'enzyme de restriction coupe le plasmide d'un côté et le fragment de restriction d'un coté, les autres cotés sont intacts et les coté coupés s'emboitent.  [...]

PCR et plasmide-protocole article scientifique en anglais (dsl) non compris help!!!

The expression vector was used to transform BL21 DE3 cells (Invitrogen). Transformants were selected on LB medium plates containing 50 ¼g ml1 ampicillin, and the sequence was confirmed by DNA sequencing, which was carried out using the dideoxychain-termination procedure developed by Genome Express.   [...] En survolant rapidement, il m'a semblé comprendre que c'est un premier plasmide qui te premet ensuite d'inserer plus facilement ton fragment d'interet dans tout types de vecteurs d'expression, sans avoir à te preoccuper de choisir tes sites de restriction, et de reflechir au sens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comprendre les cartes des plasmides

Il me semble que ce sens déterminer le sens de transcription du gène... aussi, lorsque l'on insert un fragment, le sens aura une importance ( selon l'insert )/.  [...] Salut, avec de la chance dans ta séquence tu as des site de restriction ce qui fait que lorsque tu vas couper une enzyme de restriction en dehors de la séquence et une dedans même si c'est bout francs ou pas tu obtiendras donc un fragment d'une masse connu parce que tu as fais la cartographie de ton plasmide avec le sens A et B, puis par électrophorèse tu détermines lequel des plasmides possèdent le fragement en question avec le bon poid moléculaire.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

Si le fragment que je désire insérer dans ce plasmide possède également deux extrémités A, il peut alors s'insérer indfféremment dans le plasmide selon deux orientations.  [...] Comme on le voit ici, cette enzyme coupe spécifiquement les sites methylés. Cette methylation ne survient qu' in vivo dans les organismes vivants. Donc dans une PCR faite sur un plasmide seul ce dernier est methylé. Vous ne coupez que le plasmide et ne conservez que votre fragment de PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

on met les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...] Pas nécessairement de l'ampicilline. Le choix du marqueur de sélection dépend du plasmide que vous utilisez. Le plus courant est que ce plasmide contient un gène de résistance à l'ampicilline. Quand vous transformez votre bactérie avec votre plasmide, ce dernier lui confère la résistance à l'ampicilline.  [...]

[Biologie Moléculaire] Principe des banque génomique/cDNA

On est d'accord qu'on cherche à assembler des petits bouts qui vont constituer un gros bout (des fragments de tailles différentes faisant partie d'un gène). Donc, peux-tu déduire de cette idée l'importance des bouts chevauchants.  [...] Ce qui explique pourquoi cette histoire de chance n'a pas trop de sens ici (sauf si l'on ne travaille pas dans ces conditions d'excès).  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

On obtient 4 fragments, on désire obtenir un fragment de 704 pb (la moitié 5' du gène), qu'on liera sur un autre plasmide pSK lui aussi coupé par ces deux enzymes (pour avoir les bonnes extrémités). Ce plasmide pCR fait 5484 pb.  [...] Je crois, la concentration initiale de l'ADN plasmique initiale EST juste la concentration initiale du fragment digéré dont tu as besoin, parce que pour un plasmide, il n'existe qu'UN fragment de 784 bp qui est celui que tu cherches (la moitié 5' du gène, oui ).  [...]

plasmide-clonage

Ton gène ou fragment d'ADN que tu désires cloner est inséré dans le plasmide grace à un polylinker qui coupe le gène de la bétagalactosidase (bgz).  [...] en fait le plasmide porte un tout petit fragment (N-terminal) de la Bgal. Le reste de l'enzyme est codé par le chromosome. uand les deux morceaux sont exprimés l'enzyme est fonctionnelle et ca donne du bleu, quand le petit n'est pas exprimé alor l'enzyme n'est pas fonctionnelle et ca donne du blanc (du moins en theorie).  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide et enzymes de restriction

Pour un TP de biologie moléculaire je dois couper un plasmide avec deux enzymes de restriction différentes, je voulais savoir comment (si c'est possible) empêcher le fragment découpé de se recoller à mon plasmide et ensuite comment récupérer mon vecteur ouvert (mes cours ne sont pas clairs du tout).  [...] Est-ce que ce serait possible par exemple d'éliminer les extrémités 3' OH et 5' P pour justement éviter recollement du fragment sur mon plasmide.  [...]