• Santé - Forme, Site, Restriction

compter des cellules/marquer de l'ADN/transgenese

Il te suffit de faire une construction dans laquelle tu encadres ton ADN d'intérêt, par 2 séquences présentes chez le porc. Tu auras une recombinaison homologue et une insertion site spécifique entre ces 2 séquences sur le génome de ta bestiole. Ca se passe par linéarisation interne ou externe, à savoir qu'une linéarisation externe est mieux pour la stabilité qu'une linéarisation interne (car dans ce dernier cas tu peux de nouveau avoir des recombinaisons homologues après ton insertion.).  [...] Donc concrêtement, tu coupes ton plasmide circulaire grâce à un site de restriction et tu obtient ton plasmide sous forme linéaire qui peut ensuite s'insérer par recombinaison homologue.  [...]

Carte de restriction

Qu'est-ce qu'une carte de restriction Reportez les résultats sous forme linéaire en indiquant les sites de restriction pour le plasmide A et B.  [...] Correct. J'ai adopté ce format d'écriture sous forme linéaire par soucis de clarté pédagogique en présupposant que le 1er site de restriction est en position 1 dans la séquence linéaire.  [...]

Carte de restriction

Bonsoir, je n'arrive vraiment pas à comprendre la notion de carte de restriction, en fait il y a un exemple particulier qui me tracasse, disons que nous avons une portion d'ADN à étudier et que nous avons deux cas deux figures qui se présentent soit la formation soit l'abolition d'un site de restriction et nous allons faire une double digestion avec deux enzymes.  [...] Disons que l'enz 1 coupe aux deux extremités et le site de restriction sur lequel va agir une enz2 soit formé soit aboli va se trouver au milieu, d'apres ce que j'ai compris, si le site est aboli= pas de coupure au milieu par l'enz2 et nous aurons juste les coupures aux extremités par l'enz1 ce qui va former un seul fragment, maintenant si on l'hybride avec une sonde, qui s'hybride avec la partie vers le milieu de le séquence on aura logiquement un seul trait dans l'electrophorse non vu que la sonde va s'hybrider avec le fragment.  [...]

[Génétique] Choix amorces amplification portion ADN

5' CG CTCGAG CTT AGG GTG CCA TTT AAC 3'-. amorce avec 2 nucleotides au hasard, mon enzyme de restriction, et 18 nucléotides pour donner 26.  [...] - l'enzyme de restriction reconnait une séquence (souvent palindrome ) de l'ADN, s'y fixe, mais sous quelle forme est cette enzyme ( est-ce qu elle doit etre complémentaire du brin d'ADN, ou peut importe sa forme, elle reconnait le site, s'y fixe et ne doit pas s'apparier à l'ADN).  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme de restriction

Ce que vous appelez marqueur c'est simplement une mutation dans un site de restriction qui va faire qu'un fragment d'ADN, obtenu à partir d'un gène donné, va être coupé, ou non, par une enzyme de restriction, selon que le gène est sous la forme d'un allèle, ou d'un autre.  [...] En gros quand la mutation est présente l'enzyme de restriction est incapable de reconnaître son site de restriction et ne va pas le couper.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

ou bien vu que l'echantillon 4 ne semble exister qu'en forme linéaire, il est possible qu'avec PvuII, il n'y ai pas de coupure (si la coupure pour donner la forme linéaire a été faite au niveau du site de restriction que reconnait PvuII), ou alors 2 fragments et donc 2 bandes qui migrent plus loin que la simple forme linéaire du plasmide.  [...] et pour BGIII. minimum 2 bandes (si le site ou a été coupé le plasmide est un des sites de restriction de BGIII) ou 3 bandes. Mais ou ce placeraient elles sur le gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage petit fragment d'ADN

Moi je rajoute avant le site des nucléotides, car certaines enzymes de restriction ont besoin d'un environnement nucléotidique pour fonctionner.  [...] Le produit PCR est effectué à l'aide d'amorces dont le site de restriction a été rajouté avec 3 nucléotides en amont. Celui-ci a été purifié à l'aide d'un kit de purification de produit PCR sans passer par une extraction sur gel car j'ai un produit bien spécifique.  [...]

Southern blot et séquençage - Interprétation

Et on remarque que la mutation (transversion) qui a transformé le A en C, a fait apparaitre le site de restriction de l'enzyme (CTCGAG) chez l'individu 2.  [...] Donc on peut en déduire que cette mutation a coupé au niveau de ce site le fragment d'ADN de l'individu 2, ce qui explique le mauvais fonctionnement de son activité enzymatique.  [...]

Primer de PCR

Quand on donne une amorce pcr on donne la sequence nucleotidique, le site de restriction et le clamp.  [...] Sinon, dans une amorce dans laquelle tu rajoutes un site de restriction il y a une partie identique à ta séquence, ton site de restriction que tu dois faire précédé d'un triplet/quadruplet (voir plus) de nucléotiques pour assurer une restriction efficace (un site de restriction en extrêmité 5' d'une amorce, ce n'est pas top pour l'enzyme de restriction).  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

J'ai lu que si je veux muter un codon, je dois faire des primers avec 21 nucleotides en amont er 21 en aval de mon codon mute pour etre sur que le primer puisse se fixer. Alors je ne comprends pas comment les segments qui contiennent le site de restriction peuvent se terminer par la codon mute vu que le codon est entre 21 nucleotides de part et d'autre.  [...] Anyway, je vais faire me patiente et attendre le dessin, je vais peut etre comprendre. Mais je bug sur le site de restriction parait que l'enzyme DpnI est une 4-cutter du dam methylated DNA, so je peux regarder si j'ai ce site.  [...]