• Santé - Forme, Protéine, Extrait

un peu de biochimie!

je recherche le nombre d'u.e. par mg de proteine d'un extrait cellulaire.  [...] un graphe vi (en pmol de produit formé par min et par mg de protéine de l'extrait cellulaire) = f concentration (µM).  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

En fait on étudie la spécificité de l'amplification, déterminé par la taille de l'amplicon pour les raisons que j'ai expliquées, par une étape située après la PCR en elle même, comme lors d'une PCR normale. On part d'une température basse genre 50°C et on l'augmente progressivement jusqu'à 95°C où tous les brins d'ADN seront séparés.   [...] Pour regarder si un gène s'exprime, c'est simple, on regarde s'il y a des ARNm (donc dans ce cas ce doit être un gène), en gros on les extrait, on les rétrotranscrit (on forme l'ADN complémentaire grâce aux enzymes de virus et on fait une PCR) ou on cherche la protéine correspondante pour être vraiment sur qu'il y a traduction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Pour l'anticorps c'est un anticorps polyclonal commercial dirigé contre ma protéine et qui fonctionne pas mal dans les autres applications pour lesquelle je l'utilise. En revanche ce dont je suis à peu près certain c'est spécificité de ce WB. J'ai co-migré de l'extrait protéique non transformé et la colonne reste totalement vide.  [...] De la même manière j'ai co-migré un extrait protéique obtenu après transformation des bactéries avec un pGEX vide et là aussi la colonne reste entièrement vide. Ces contrôles signifient bien que mon anticorps ne marque pas une protéine bactérienne endogène ou un bidule provoqué par l'insertion du seul plasmide.  [...]

[Biochimie] retard sur gel

Pensez vous qu'il y a une interaction directe La nature des échantillons par exemple est très critique. protéine recombinante pure, extrait enrichi, extrait total, etc.  [...] Pourquoi ne pas essayer avec un extrait protéique contenant votre protéine que vous savez active, et de tenter un supershift ou une inhibition avec un anticorps spécifique.  [...]

Origine de la vie et première cellule

C'était juste pour partager avec vous l'extrait d'un blogger américain qui cite les travaux de Doug Axe et d'Anne Gauger (Université de Cambridge, directeur du Biologic Institute), qui ont calculé une approximation de la probabilité de la formation d'une protéine à partir d'éléments simples (attention Anglais).  [...] PS. En relisant moi-même l'article je me rend compte que j'ai fait quelques erreurs, ce n'est absolument pas de votre faute désolé. il semblerait que le docteur Doug Axe a déterminé la probabilité pour qu'un seul acide aminé apparaisse par chance dans une genre de bouillie minérale de manière totalement aléatoire, et Mr Meyer a déterminé lui par extension la probabilité pour qu'une seule protéine de 150 amines se forme.  [...]

[Biochimie] Rendement et facteur de purification

Dans ce cas, le rdt serait. combien de % de la protéine que j'avais dans l'extrait initial j'ai réussi à purifier dans mon extrait final tandis que le facteur de purif serait de combien ai-je réussi à enrichir mon extrait initial en la protéine voulue c'est ça.  [...] Normalement, il y a notre protéine d'intéret A + pleins d'autres protéines dans l'extrait initial. On a donc une activité totale x dans cet extrait qui est proportionnelle à la quantité de A dans l'extrait.  [...]

Clonage de la plante, ça marche pour...? - Page 2

Pour extraire les cytokines du bourgeon, tu ne peux le faire toi même hors d'un laboratoire. Il faut passer par des étapes de broyage avec du méthanol, des centrifugation, des passages en colonne... avec des produits spécifiques.  [...] Si la réponse du site est positive, je me lancerai surement dans le projet, car j'ai mentionné la question de la concentration en hormone pour le bourgeonage, car le site est très ciblé sur ce domaine de culture in vitro.   [...]

[Biologie Moléculaire] Immunoprécipitation et immunodéplétion

Je n'ai pas tout à fait compris la différence entre une immunoprécipitation et une immunodéplétion... J'ai juste compris que ces deux techniques permettent l'isolement d'une protéine d'intérêt (et son enrichissement) à partir d'un mélange de protéines d'un extrait.  [...] Par exemple, on peut étudier une interaction entre 2 protéines. Alors que dans une immunodéplétion on voudra analyser l'extrait protéique déplété d'une protéine en particulier. On peut s'en servir par exemple pour savoir si une protéine est indispensable pour activer un checkpoint, etc.  [...]

[Biochimie] Qu'est-ce qu'un sac à dyalise ?

Imaginez un extrait cellulaire. On a des polysaccharides, des lipides, des acides nucléiques, et des protéines de toutes tailles. On choisit de dialyser l'extrait car on a une protéine de 200 kDa qui nous intéresse, mais elle est perdu au milieu de toutes ces molécules.  [...] Pour augmenter la pureté de notre protéine au sein de notre extrait, on prend donc une membrane de dialyse dont la porosité est inférieure à la taille de la protéine, par exemple une porosité de 150 kDa. Ainsi, les molécules de taille inférieure à la porosité passeront au travers de la membrane et équilibreront les deux compartiments.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

(On nous donne la photo d'un gel dénaturant donc avec 4 piste. 1. le marquer de PM, 2. extrait protéique brut, 3 rot. après la premiere étape de purification et 4. protéine après la deuxième étape de purification).  [...] Il semble que l'on a fait une étape ou l'on obtient la protéine un peu plus purifié de l'extrait cellulaire (la comparaison des deux nous donne quelques bandes en moins ) et dans le puit 4 une protéine purifié de façon plus nette (il ne reste que la bande de la protéine).  [...]