• Santé - Extrémités, Sites, Restriction

Technique "REMI"

Je ne comprends pas la technique REMI. Restriction Enzyme Mediated Integration, quelqu'un pourrait t'il me l'expliquer.  [...] On mélange de l'ADN plasmidique linéarisé avec une enzyme de restriction, celle-ci est capable de générer des extrémités cohésives compatibles dans le génome. Par la suite, cette enzyme stimule l'intégration de cet ADN dans les sites de restriction apparentés dans les chromsomes, souvent en une seule copie qui provoque que très peu de dommages dans le génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sequence a ajouter avant un site de restriction

Il me semble qu'il est préférable d'ajouter quelques bases avant (dans le cas du 5') et après (pour le 3') les sites de restriction afin que l'enzyme puisse cliver les extrémités de l'amplicon.  [...] Je ne pense pas qu'il y ait une séquence type, veillez juste à conserver un %GC correct et a ne pas créer de site de restriction qui serait ennuyeux par la suite.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Pour ce faire nous allons réaliser une PCR du gène Tet avec deux amorces contenant des sites de reconnaissances pour les enzymes de restriction XbaI et HindIII. Visiblement les amplicons obtenus possèdent à chaques extrémités le site de reconnaissance pour ces enzymes de restrictions et une Adénosine (d'ailleurs là j'ai pas compris d'où elle vient).  [...] D'où vient l'A Tout simplement, on l'a rajouté au niveau des oligos Tu peux carrément pousser plus loin si tu as besoin, en ajoutant des sites de restriction par le biais des oligos. Ca s'appelle PCR d'assemblage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage - Page 2

Tout simplement car il n'y a aucuns sites de restrictions (qui puissent convenir) aux alentours...les deux sites de restrictions que j'ai besoin de placer aux extremités servent a isoler les cassettes que j'ai besoin de recuperer si je m'ecarte je vais amplifier au passage donc des parties que je n'ai pas besoin et qu'il me sera dur d'enlever apres.  [...] je suis bien d'accord, mais ces sites vont etre au niveau des morceaux de genes aux extremités que je ne veux pas donc certes apres restrictions ils seront amputés et donc pas fonctionnel mais il y aura toujours des morceaux donc c'est pas très propre, les deux sites uniques que j'ai mis juste pour cadrer la sequences que je veux ont ce role, d'eviter d'avoir les parties aux exterieurs.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

On prélève l'insert (le gène à cloner) grace a une enzyme de restriction qui va cliver l'ADN sur des sites de restriction spécifique (c'est une séquence palindromique). On peut ensuite amplifier l'insert par PCR. puis l'insérer dans le polylinker avec une ligase.  [...] Si on utilise la même enzyme de restriction pour le vecteur et l'insert, on aura le site de restriction du vecteur qui va correspondre aux extrèmités débordantes de l'insert, donc celui-ci pourra s'hybrider facilement avec le vecteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Elles permettent notamment en génie des vecteurs, d'ouvrir un plasmide, et d'y insérer un gène YFG dont les extrémités sont construites pour etre complémentaires avec le site de restriction pour que cela colle pile poil.  [...] 1. identifier votre fragment (si l'organisme a déjà été séquencé, voir la carte de restriction et repérer les sites de restrictions absents du fragment).  [...]

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Bonjour, est ce que quelqu'un aurait une idée sur comment vérifier l'efficacité de la digestion enzymatique par les enzymes de restrictionest ce par électrophorèse.  [...] Ceci dit, cela ne fonctionne pas dans tous les cas, par exemple si la taille de la molécule après digestion est très proche de celle avant digestion (cas des sites de restrictions aux extrémités d'un produit de PCR).  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide ligature

C'est ce que jai fais car ce sont les questions précedentes et oui on retrouve les sites de restrictions, il suffit juste donc de faire ca Ca me semble trop simple ^^.  [...] effectivement, certaines enzymes de restriction générant des extrémités protrusives (par franches = blunt) peuvent être cohésives. Dans ce cas, généralement on ne peut pas recouper avec les 2 enzymes utiliser au début. Si tu peut trouver un livre de NEB (New England Biolabs) ou peut être sur leur site, tu as un tableau qui récapitule tout.  [...]

[Biotechnologie] Vecteur d'expression.

un vecteur d'expression comportant 2 régions régulatrices, un promoteur P (200b) et une région amplificatrice E1 (600b) issues de 2 gènes différents. Les extrémités 5' et 3' de P et E1 sont franches et ne peuvent pas être coupées par une enzyme de restriction.  [...] Sachant que les extrémités ne peuvent pas être coupées par une enzyme de restriction, l'intégration du gène se fera par recombinaison.  [...]

[Biochimie] Travaux pratiques de biochimie des systemes integrés urgents

Le protocole de ceci comprend une première PCR pour produire ton gène d'interet à l'aide de primer possédant des extrémités suplémentaires contenant un site de restriction semblables à ceux présents sur ton plasmide EGFP.  [...] Tu produits et purifie ce fragments, puis tu le clive aux extrémités pour former les bouts colants, tu produits et linéarise EGFP de la même manière. Tu utilise une simple T4 ligase pour les rassembler et tu le produit en quantité suffisante.  [...]