• Santé - Extrémités, Enzyme, Restriction

[Biotechnologie] Vecteur d'expression.

un vecteur d'expression comportant 2 régions régulatrices, un promoteur P (200b) et une région amplificatrice E1 (600b) issues de 2 gènes différents. Les extrémités 5' et 3' de P et E1 sont franches et ne peuvent pas être coupées par une enzyme de restriction.  [...] Sachant que les extrémités ne peuvent pas être coupées par une enzyme de restriction, l'intégration du gène se fera par recombinaison.  [...]

Technique "REMI"

Je ne comprends pas la technique REMI. Restriction Enzyme Mediated Integration, quelqu'un pourrait t'il me l'expliquer.  [...] On mélange de l'ADN plasmidique linéarisé avec une enzyme de restriction, celle-ci est capable de générer des extrémités cohésives compatibles dans le génome. Par la suite, cette enzyme stimule l'intégration de cet ADN dans les sites de restriction apparentés dans les chromsomes, souvent en une seule copie qui provoque que très peu de dommages dans le génome.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

Si on utilise la même enzyme de restriction pour le vecteur et l'insert, on aura le site de restriction du vecteur qui va correspondre aux extrèmités débordantes de l'insert, donc celui-ci pourra s'hybrider facilement avec le vecteur.  [...] Mes professeurs appelaient ça digestion ménagée. Je crois qu'on utilise un chélateur d'ions divalents pour limiter l'action des enzymes de restriction ( EDTA dans le cas des endonucléases, qui va chélater le Mg2+ dont ces enzymes ont besoin pour fonctionner).  [...]

[Biologie Moléculaire] Sequence a ajouter avant un site de restriction

Il me semble qu'il est préférable d'ajouter quelques bases avant (dans le cas du 5') et après (pour le 3') les sites de restriction afin que l'enzyme puisse cliver les extrémités de l'amplicon.  [...] Je ne pense pas qu'il y ait une séquence type, veillez juste à conserver un %GC correct et a ne pas créer de site de restriction qui serait ennuyeux par la suite.  [...]

génie génétique

Bonjour à tous, lorsque l'on veut insérer un fragment de restriction dans un plasmide pour pouvoir produire des clones, si ce fragment a 2 extrémités identique il pourrait se combiner avec extrémité du plasmide dans un sens aussi bien que dans l'autre alors comment grâce à enzyme de restriction peut-on choisir dans quel sens on veut que ce fragment se positionne.  [...] On peut choisir de fabriquer un fragment dont chaque extrémité présente un site de restriction différents ET qui sont aussi sur le plasmide, comme ça le fragment ne pourra s'insérer que dans un sens qui est celui sur le plasmide de clonage. ok.  [...]

[Biochimie] Rechercher sites de restriction

Déjà connais-tu des programmes online permettant de trouver les sites des enzymes de restriction connues sur une séquence donnée Quelle peut être l'utilité du programme que tu décris, s'il existe (ce qui m'étonnerait beaucoup).  [...] En revanche, tu peux trouver une bonne vidéo montrant la coupure d'un plasmide par une enzyme de restriction, puis le collage par une DNA ligase des deux extrémités d'un insert dans ce plasmide clivé. http.//www.youtube.com/watchv=aA5fyWJh5S0. Si tu maitrises les logiciels vidéos, tu peux extraire uniquement la coupure par l'enzyme pour ton projet.  [...]

activité endonucléasique

Bonjour, qu'est ce qu'un complexe enzymatique avec activité endonucléasique merci de m'éclaircir.  [...] quel type de complexe. Une endonucléase est un enzyme qui coupe les acides nucléiques (ADN ou ARN) au sein même de la molécule (alors que les exo c'est à partir des extrémités). Tu as notamment des endonucléases de restriction qui elles reconnaissent des séquences spécifiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation??

Je viens de repenser à un de mes sous-clonages qui avait eu du mal à marcher. J'étais arrivé à savoir que mes inserts était bien clivés, de part et d'autres par la même enzyme de restriction car après clivage et ligation, sur mon gel d'agarose j'avais un profil en échelle.  [...] une bande à 800 pb (insert), à 1600 (dimère d'insert), 2400 pb (trimère),...Cela montre que l'insert se ligue à lui-même grâce au fait qu'il soit clivé par la même enzyme de restriction à chacune de ses extrémités. Pour un clonage orienté, je doute que cette vérification soit aussi évidente.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

1- ecrit un site de restriction sur le papier enzyme regarde ou l'enzyme va couper, et essaye de trouver tous les moyens de couper. tu vas vite t'appercevoir qu'il y a deux grandes familles de coupures.  [...] Une coupure de l'ADN peut être engendré soit mécaniquement ou par des agents chimiques mais dans ce cas là on coupera l'ADN de façon aléatoire on ne pourra pas prédire l'endroit où ça va se casser tandis qu'avec une enzyme de restriction on coupe l'ADN à l'endroit où sera son site de restriction.  [...]

Enzyme de restriction et activité étoile!

L'activité étoile survient lorsqu'une digestion ne se produit pas dans les conditions optimales de l'enzyme. L'enzyme se met à couper a peu près partout et son site de restriction, souvent, se raccourci et l'enzyme produit plus de fragments que supposé. Ma question est, disons qu'une enzyme produit des extrémités 5' cohésives théoriquement, est-ce qu'elle va continuer de produire des extrémités 5' cohésives même si elle est dans des conditions d'activité étoile.  [...] Sinon, si l'objectif est de n'obtenir que des fragments à bouts cohésifs, c'est une autre paire de manche (pourquoi ne pas essayer une digestion partielle). Ou un clonage qui permettent d'insérer un site de restriction plus commun.  [...]