• Santé - Extrait, ARN, Méthode

Pourquoi extraire de l'ARN

Je viens de faire un TP dans lequel nous avons extrait de l'arn par la méthode de Chomczynski et Sacchi (guanidine, thiocyanate, phénol, chloroforme). J'aimerais connaitre les applications de cette technique. Existe t-il des techniques plus efficaces que celle-ci D'autre part, est-il parfois plus intéressant d'extraire de l'arn que de l'adn Merci d'avance.  [...] De plus dans les cellules d'organismes sup, travailler sur l'ADNc (a partir de l'ARN donc) permet d'eviter la presence d'introns.  [...]

real time pcr

donc maintenant j ai mes oligos (j espere que ca marchera)mais j ai un autre problème, j ai extrait mes ARN avec la methode du phénol chaud, est ce que ca pose des problemes pour une real time pcr ou l etape de reverse transcription si oui quel kit dois je utiliser pour purifier.  [...] Donc bon, si on met assez de trizol et que l'on laisse incuber assez longtemps on a pas de contamination. D'ailleurs, je me suis mal exprimé en disant bouffer. Ca n'est pas une dégradation de l'ADN mais simplement une séparation dans les phases. On a même reussit à faire des PCR à partir d'extraction trizol (m'enfin c'est lourdingue à faire).  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage des ARN à l'orcinol

Je ne connais pas la methode de dosage a l'orcinol. Mais s'il est vrai que ca ne dose que les purines, fait attention au GC% de ton organisme pour tes calculs.  [...] Donc, j'ai une remarque à faire. ta gamme étalon, si tu l'a faite avec l'ARN commerciale de levure, il n'y a pas de différence dans le rapprot C G, ton absorbance est proportionnelle à ta concentration. Il y aurait un soucis seulement si l'ARN de ta gamme vient d'une espèce différente de la levure dont tu doses l'ARN.  [...]

Beljanski - Page 2

A partir de la variété de bactérie Escherichia Coli K12 connue pour être non pathogène, Mirko Beljanski a trouvé une façon naturelle d'extraire ces fragments d'ARN (extrait ribonucléique d'ARN).  [...] Sincèrement, ça me paraît très cher pour des extraits de plantes, même si on applique une méthode d'extraction dessus, et le fait que le dosage du produit dans les gélules ne soit indiqué nulle part me semble aussi louche.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage ARN

Bonjour tout le monde, je suis toute nouvelle ici, j'ai une question concernant un TP de biologie moleculaire. Nous avons doser les ARN de la levure, par deux méthodes, colorimétriques et spectro, on me demande de commenter mes résultats mais ils sont sensiblement les mêmes.  [...] Oui désolé j'ai mal détaillé ma question. En fait j'ai réalisé un dosage direct par spectro sur deux ARN inconnu, et un ARN que nous avons extrait. J'ai réaliser ces memes mesures mais par un dosage différents, qui utilise l'orcinol. On me demande de comparer ces deux méthodes, et la je suis complètement perdue. lool.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

Après avoir prélevé un aliquot de la culture (5mL), plusieurs cycles de rincages/centrifugations, je broie la biomasse à l'azote liquide. Sur cette biomasse, j'extrais les ARNtotaux avec le kit GenElute Mammalian totalRNAkit (SIGMA). Quand ensuite je veux doser mon ARN extrait au spectro, j'ai des valeurs beaucoup trop faibles (0,004) voire négatives.  [...] Je me dis que peut-être le kit n'extrait pas l'ARN de façon optimale, ce qui expliquerait que je ne puisse pas le doser au spectro.  [...]

[Biochimie] Extraction ARN

J'utilise une méthode de vibro-broyage en mettant l'organe dans un petit tube 1,5mL contenant 1mL e trizol et 500µL de billes permettant le broyage.  [...] Je pense donc, qu'il faut que je refasse migrer tous mes ARN que j'ai extrait en faisant au préalable une nouvelles solubilisation car il faut que mes ARN soient ok pour que je continue ma manip.  [...]

problème d'analyse de gel de migration

j'expose mon probleme. apres une rt pcr, je fais migrer mes adn. un couple d'amorce par puits, donc normalement un seul trait visible sur le gel si la rt pcr a marché ou alors rien... mais là, j'obtiens plusieur bandes distinctes pour el meme puit. les amorces ne pouvant s'hybrider qu'a un seul endroit sur le genome, je ne comprend pas comment on peut obtenir plusieurs produits pcr avec un seul couple d'amorce.   [...] SI ton ARN initial est extrait d'un tissu, ne peux-tu pas avoir des variants d'épissage, tout bêtement Dans ce cas tu aurais plusieurs ADNc suite à la RT.  [...]

[Biochimie] qPCR :

Sachant que je sais que cette proteine est exprimée dans l'organe d'où j'ai extrait l'ARN, et que mon ARN (et mon ADNc) est de bonne qualité, je ne comprends pas pourquoi au bout de la 3eme paire de primers designées j'arrive toujours pas a amplifier mon gene d'interet.  [...] Il se peut que le problème vienne de l'age de la souris, j'ai regardé dans des papiers, et c'est vrai qu'ils ne precisent pas l'age des souris d'ou ils ont extraits l'ARNm, à part dans un des articles où ils prelevent les testicules dans des souris de moins d'un mois alors que moi je l'ai fait chez une souris qui devait avoir 2mois et demi.  [...]

Transférer la mémoire d'un individu à un autre : c'est possible !

Pour transférer la mémoire d'un escargot de mer ( trained donor ) à un autre escargot de mer ( naive recipient ), des chercheurs ont extrait son ARN ( trained ARN ) puis l'ont injecté dans l'autre escargot. De même, ils ont mis cet ARN en présence de neurones sensoriels ( sensory neurons ).  [...] Ils ont ensuite extrait de l'ARN de ces escargots pour l'injecter à d'autres, n'ayant pas été préalablement sensibilisés. Résultat, ces escargots ont montré une contraction défensive moyenne de 40 secondes. Pour aller plus loin, ils ont mis des neurones sensoriels d'escargots en présence de cet ARN sensibilisé. Et ils ont observé une excitabilité accrue.  [...]