• Santé - Extrait, ADN, éthanol

[Biochimie] Bande inconnu sur gel d'agarose

Une partie de cet ADN a été digéré totalement pat EcoR1. j'ai fait migrer l'ADN digéré et non digéré sur un gel d'agarose 1% et voila ce que j'obtiens.  [...] Je pensais ne rien avoir, l'ADN étant sous forme de chromosomes ils restent bloqués dès le début du gel vu leur taille, et puis de toute façon les souris n'a pas qu'un seul chromosome.  [...]

[Identification] Extraction d'ADN

Homogénéiser doucement le contenu de l'Erlenmeyer, puis transférer 10 mL de ce filtrat dans l'éprouvette. Ajuster ensuite le volume jusqu'à 40 mL avec la solution froide d'éthanol à 90° (verser très délicatement et lentement la solution d'éthanol).  [...] Pour la question 3, je ne saurai pas décrire exactement le rôle de chaque produit. Par contre je pense que l'éthanol permet de cristaliser une fois mélanger avec le contenue afin de faire apparaitre l'ADN.().  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution d'ADN "contaminante"?

Pour MaliciaR. ADN visqueux = culot après précipitation à l'Ethanol mal resuspendu, ou présence d'ADN génomique (volontaire ou non.). Pour aider, il est possible d'incuber @ 50°C pendant 10min pour aider à la resuspension. Dans le cas d'ADN génomique, on peut soniquer (tout dépend des applications que l'on veut faire après, mais 10-30s suffit largement).  [...] Sinon, j'ai extrait mes ADN à partir de tissus animaux lysés 3h à 55° au bain-marie, puis phénol/chloroforme avec des tubes contenant un gel bloquant la phase P/chlo (très pratique) et Éthanol précipitation avant de reprendre mon culot dans de l'eau.  [...]

[Biochimie] Conservation ADN

Il existe plusieurs moyen d'extraire l'ADN, le plus classique étant le phénol/chloroforme (l'ARN ne s'extrait pas au phénol choloroforme mais plutôt au trizol/chloroforme/isopropanol). Assurez vous que ce que vous avez conservé était propre. Si c'est juste un digest de tissu il y a quand même des risques que les DNAses aient bien fait leur boulot.  [...] Oui c'est bien de l'ADN que j'ai extrait. j'ai utilisé un protocole à base de SDS 20%, par la suite j'ai utilisé le phénol-chloroforme-isoamyl dans une série de 4 centrifugations. ayant obtenu mes pelotes après avoir rejouté de l'éthanol, j'ai suspendu dans du TE et conservé à 4° comme je l'ai dis plus haut.  [...]

Conservation d'ADN

Malheureusement je n'ai trouvé aucune autre information. Combien je dois peser si je veux une solution de 1L et combien mettre d'EDTA (les formules me suffise je peux faire le calcul par la suite) Et aussi j'ai extrait mon adn avec du sel du vinaigre et je l'ai fait précipité avec de l'éthanol, est-ce que ça des risque d'interférer avec mon tampon Et pour finir, je vais le doser par spectrophotométrie UV, est-ce que mon tampon risque de brouiller l'analyse (même si je fais un blanc).  [...] Normalement pour le dosage on fait un blanc avec le tampon qui contient l'ADN (donc du TE dans votre cas) même si la différence ne sera pas enorme.  [...]

[Génétique] meilleur conservateur d'ADN

L'ethanol 70% à -20°C est très bien pour conserver l'ADN. Ceci dit, si tu ne conserves les tissus que pour en extraire l'ADN, à ta place, je ferais deja une extraction, je pelotterais l'ADN et je le conserverais ainsi à -20°C, flottant dans l'ethanol.  [...] On peut aussi extraire et utiliser de l'ADN de pièces incluses en paraffine mais je doute que l'intégrité soit aussi bonne que celle obtenue par la précédente méthode.  [...]

inhibiteurs de la qPCR

Sachant que la qPCR sera utilisée pour quantifier le nombre de copies de gènes et que l'ADN génomique a été extrait par la méthode Salting out.  [...] C'est l'ADN génomique d'un insecte (une mouche gallifère ). L'extraction d'ADN avec le CTAB n' a pas marché donc j'ai suivi le protocole du salting out ( precipitation des débris cellulaires avec le NaCl et lavage avec l'ethanol absolu pus l'ethanol 70).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

En ce qui concerne l'extraction d'ADN, sous quelle forme on obtient notre ADN vers la fin du protocole d'extraction (precipitation à l'éthanol).Autrement dit, est-ce qu'on est obligé d'obtenir de l'ADN sous forme de pelote ou bien ce n'est pas toujours le cas.  [...] Personnellement j'ai extrait de l'ADN génomique du soja par les méthodes classiques basées sur l'utilisation de détergent (CTAB et SDS ) par deux protocoles différents et dans les deux cas j'ai obtenu un précipité sous forme d'écaille. je n'ai pas compris qu'on est-ce que on obtient une pelote d'ADN et quelle est la relation entre la forme et le degré de contamination de l'ADN.  [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

J'aimerais savoir pourquoi le rendement de la précipitation de l'ADN dans de l'éthanol augmente lorsque l'on baisse la t°.  [...] Il a été montré qu'on pouvait précipiter l'ADN a temperature ambiante avec la meme efficacité qu'a -20°C. Cette croyance proviens du fait que l'ethanol deviens plus visqueux a basse temperature, mais ca n'a pas d'influence sur l'efficacité de précipitation.  [...]

Solubilité d'ADN et d'ARN

J'ai une question concernant la solubilité d'ADN et d'ARN.. D'apres ce qu'on m'a dit l'adn est soluble dans l'eau et l'arn dans les solvants organiques comme l'alcool, phénol, chloroforme.. Mais ARN précipité en présence d'alcool mais non pas l'ADN.. Est ce possible Pouvez quelqu'un m'expliquer SVP.  [...] L'ADN et l'ARN ne SONT PAS SOLUBLES dans le phénol, le chloroforme, l'ethanol, l'acétone, l'isopropanol etc... C'est d'ailleurs bien pratique quand on veut les extraire et les purifier.  [...]