• Santé - Extraction, Protéines, Cellules

[Biochimie] La synthèse des protéines !

Cellule nuclée et énuclée. des acides aminés radioactifs (leucine h3) ont été ajoutés au milieu nutritif des cellules en culture. Certaines cellules sont normales, d'autre ont été énuclées ( extraction du noyau) avant l'introduction de h3 dans le milieu. Cette technique d'autoradiographie permet de localiser la leucine incorporée dans les proteines.  [...] Tu peut en conclure que l'extraction du noyau ne stop pas la synthèse des protéines. Lorsque le noyau est retiré, il reste des ARNm dans ta cellule, et ce sont ces ARN qui sont traduit en protéines.  [...]

[Biotechnologie] Tampon de lyse

Ce tampon intervient directement après le lavage des cellules (bactéries ou cellules humaines), et à pour rôle de les détruire. Suivant ce que l'on veut faire ensuite (extraction protéines, ADN et/ou ARN), la composition du tampon varie, mais il contiendra généralement un détergeant afin de briser la membrane cellulaire et d'autre composants, également variables, mais aussi des sels et un pouvoir tampon au pH désirée.  [...] Bref, la composition du tampon de lyse est (très) variable suivant la manip' que l'on réalise, mais son rôle est généralement d'extraire notre produit en détruisant la cellule.  [...]

[Biochimie] Comment désagréger des protéines recombinantes?

[Biochimie] Comment désagréger des protéines recombinantes.  [...] Comment désagréger des protéines recombinantes La protéine est produite dans E.coli puis je procède à une extraction protéique, une purification IMAC et un dessalage. Enfin, je la filtre à 0.2um avant de la tester sur cellules mais la protéine d'intêret forme des agrégats après quelques jours de conservations à 4°C ce qui m'oblige à relancer des campagnes de production.  [...]

Extraction simple des protéïnes végétales

Vous savez, le truc tout simple pour extraire l'ADN J'ai lu que ça brise les cellules y compris les cellules végétales. Si ça peut extraire l'ADN, pourquoi ça ne marcherait pas avec les protéïnes (a moins que l'un des produits nécéssaires à l'extraction n'altère celles-ci) Je voudrais aussi savoir si ça peut marcher avec du zeste d'orange ou du bois et si pour faire cette expérience il est impératif de mettre à tout prix les quantités de produits demandés. Merci de me donner votre avis.  [...] je ne comprends pas ta question. Ca fait longtemps qu'on sait extraire les protéines des végétaux ou autres formes de vie. C'est déjà dans les livres de chimie du XIXème siècle.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Salut, voilà un petit protocole rapide pour l'extraction des protéines. Attention, vu que tu n'as pas précisé quel est le type de cellules que tu utilises, je te donne celui que j'utilise. extraction de protéines à partir de cellules de mammifères Hela (marche avec pleins d'autres types cellulaires bien évidemment).  [...] Je disais juste ça parce que je me doute que la première fois que tu as fais une extraction prot à partir d'une boite, si tu n'avais pas dosé, tu allais mettre au pif une quantité de protéines. Avec un risque de charger trop (ou pas assez) ton puits.  [...]

[Biologie Cellulaire] extraction protéique (ERK1/2) à partir de cellules U2OS

je suis un nouveau dans ce forum, j'ai un soucis, je voulais faire des culots cellulalires à partir des boites 35mm de cellules transfectées, la derniere fois javais pas beaucoup de prot en dosage lowri sachant bien que je gratte ma boite de cellules dans du PBS et je centrifuge 1000 RP 2min, après je lyse mes cellules dans du leamli 2X et je l'ai dose et ce que kelk'un pourrait me donner un protocol.  [...] Ok je m'explique. les cellules sont des cellules U2OS osteosarcoma cells, la prot est une phosphoerk ERK1/ERK2, mais je détecte aussi des prot cytoplasmiques, merci pour la réponse c urgent.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western blot + extraction proteine

J'ai achetée le tampon de lyse RIPA que je vais utiliser mais je sais pas vraiment comment faire pour l'extraction est-ce que préalablement je dois gratter ou trypsinés mes cellules est-ce que je dois faire sa sur seulement un flask ou plusieurs quel volume de RiPa dois-je utiliser sur un flask de 75cm2 sur lequel je compte 3.10¨5 cellules/ml.  [...] Attention attention, le RIPA est un buffer principallement utilisé pour faire des IP. Si ce sont les protéines totales qui vous intéressent ce n'est pas une extraction en tant que telle qu'il faut faire, il vaut mieux lyser classiquement vos cellules dans du Laemli 1X avec béta-mercapto ou DTT.  [...]

Petite énigme à vous soumettre...

.. 20.000 manipulations Avec assez de cultures cellulaires pour chaque expérience, extraction des seconds messagers, révélation des protéines... Est-ce bien réalisable.  [...] De plus, je me permets une remarque sur ton idée de radiomarquage, qui ne me semble assez chère aussi, et la seconde méthode, avec le second messager, qui, si testée indépendamment avec chaque molécule, sous-entend... 20.000 manipulations Avec assez de cultures cellulaires pour chaque expérience, extraction des seconds messagers, révélation des protéines... Est-ce bien réalisable.  [...]

extraction et dosage des protéines totales

Je voudrais savoir quelle quantité de protéine on peut s'attendre à obtenir après extraction à partir de neurones. 1µg/million de cellules 1mg/million de cellules.  [...] J'ai ensuite trouvé que 40% d'une cellule est constituée de protéines. Mais bon il me manque encore le poids d'une cellule et le rendement d'un extraction... hin hin... je sais pas si c'est la bonne direction pour répondre à ma question.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Je suis en stage pour le M1. On travaille sur l'hypophyse de rat et on a fait une technique d'extractin d'ARN et de proteines au trizol. Ensuite les proteines sont mises dans du SDS et stockés à moins 20°C. Sauf que quand on a fait un dosage proteique par la methode de lowry d'où on a obtenu des quantités trés faibles de proteine.  [...] $récupérer les protéines apres extraction aux solvants organiques n'est pas le mieux. Je sais que l'hypophyse n'est pas énorme, mais l'idéal est d'extraire les ARN et protéines séparément.  [...]