• Santé - Extraction, Niveau, Quantité

[Biochimie] qualité protéines

Je réalise des tests de vieillissements tissulaires et regarde la dégradation au niveau ARN et Protéines.  [...] En ce qui concerne les Protéines, après extraction sur une même masse de tissus je ne vois pas de différence au niveau quantité (je m'y attendais) ni au niveau visuel (gel coloré au bleu de Comassie / bandes majoritaires). Il existe-t-il une protéine témoin de qualité à mettre en évidence en Western.  [...]

[Biologie Cellulaire] Etudier l'expression d'une protéine entre différentes cellules.

pour suivre l'expression de la protéine tu peux faire un extraction purification de la proteine dans les deux cellules séparément puis tu fait un blotting ( westerne blot pour suivre le niveau d'expression de la protéine c'est-à-dire la quantité de la protéine dans les deux cellules).  [...] pour cela tu mets les cellules en culture puis à un certain temps tu prélève les cellules et tu fait l'extraction de la protéine et purification. lorsque tu fait le westerne blot tu révélera avec des anti-corps diriger contre la protéine d'intérer. sinon tu peux faire aussi un marquage de la protéine avec des acides aminées radioactive en utilisant la technique de pulse chasse.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème quantité d'adn plasmidique après extraction

Je viens vous trouver car j'ai un petit doute quand à une extraction d'adn plasmidique. Habituellement j'utilise des kit qiagen (miniprep) et j'obtiens environ 100ng/µl de plasmide.  [...] Merci pour vos renseignements. J'ai refait une extraction en utilisant des RNases et je me retrouve avec une quantité egale à celle obtenue avec les kits.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...] Le début de l'extraction est très important. conditions d'homogénéisation (mécanique, chimique), il faut se mettre à froid, ainsi que la quantité de matériel (trop est pire que pas assez.). Comment avez vous procédé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'ARN par de l'ADN

Le test que je suis en train de réaliser consiste à extraire les ARN totaux d'une souche et de rajouter à l'extraction une quantité de plasmide précise (je précise que je cherche les ARNm correspondant à la transcription de mon plasmide). Cette quantité de plasmide est soit DNasée soit non DNasée puis une PCR sera réalisée directement sur ARN (sans RT), cela me permettra de jauger l'efficacité de la DNase du moins je l'espère.  [...] Les essais ont révélés que la DNase du kit Machery Nagel ne fonctionnait pas assez sur colonne (amplification en PCR du plasmide ajouté pendant l'extraction d'ARN). Dans la notice de cette DNase il est précisé qu'en cas de grosse quantité d'ADN, il faut utiliser la DNase après colonne puis réaliser un clean up.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel ADN stress

ces ADN sont extraient de feuilles auxquelles j'ai appliqué un stress à différents niveaux. j'ai obtenu des bandes au même niveau. c à d de même taille. mais la quantité diffère.  [...] Dans ton cas, je ne dirai pas que c'est le stress qui est entièrement responsable du résultat. Il y a beaucoup de paramètres qui peuvent expliquer ces différences de quantité après PCR (qualité des explants choisis pour l'extraction, qualité de l'extraction, PCR et réactifs capricieux, emplacement dans le thermocycleur...).  [...]

Important! besoin d'aide pour extraction ARN sur cellules de cerveau! pleaseeee

Je cherche à faire des RT-qPCR mais il me faudrait au grand minimum 10ng/uL pour travailler car je ne veux voir que 23 gènes maximum incluant les contrôles. Hors, après deux méthodes d'extraction différentes, je n'arrive toujours pas à avoir un bon ration et une quantité suffisante.  [...] En quantité effectivement c'est peu. Pour le Phénol chloroforme, vous pourrez avoir un meilleur rendement mais un matériel moins spécifique ou moins propre. Il faut au moins faire une extraction chloroforme seul pour enlever le reste de phénol (le chloroforme est tres volatil).  [...]

[Biologie Cellulaire] Isolement d'un compartiment cellulaire

-c'est une technique de séparation des différentes parties d'une cellule au moyen d'une homogénéisation puis d'une centrifugation differentielle pour donner des fractions nucléaires, mitochondriales, microsomale et des fractions solubles.   [...] Ma collègue réalise une ultra-centri à la suite de laquelle elle récupère la fraction light membrane (+1 tampon de lyse) (marqueur. dynéine) et la fraction cytosol (marqueur caspase 3).   [...]

[Biologie végétale] Qu'elle est la quantité d'huiles de certaines herbes??

Je suis entrain de faire l'étude d'un projet d'extraction et de distillation d'huiles et j'aimerai savoir la quantité d'huiles à ces plantes.  [...] En ce qui concerne le bois de santal, je pense que c'est une idée à abandonner, en raison de la rareté et du prix de ce bois, ainsi et surtout à cause de la façon souvent illégale dont ce bois est exploité.   [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

Si ta production n'est pas très grande, attention toutefois à la quantité de billes nécessaire, car plus il y a de billes, plus tu augmentes la possibilité d'intéractions aspécifiques avec les billes. Ta protéine est elle soluble Car il se peut aussi qu'elle soit produite en grande quantité, mais non solubilisée dans le tampon d'extraction.  [...] La quantité nécessaire dépend de plein de paramètres, dont le poids moléculaire de la protéine d'intérêt (plus son PM est petit, moins il y a en besoin, car plus il y a de mole/µg), la force d'intéraction avec le partenaire, du type de détection (western blot, autoradiographie).  [...]