• Santé - Extraction, éthanol, Protéines, Phase, Supérieur

[Biologie Cellulaire] protéines dans la phase organique?

J'aurai voulu savoir si quelqu'un aurait pu m'eclairer sur le fait que les proteines lors d'une extraction au phenol chloroforme migrent dans la phase organique alors qu'elles sont le plus souvent cytosolubles... Ne devraient elles pas se retrouver dans la phase acqueuse.  [...] Moi j'ai fait une extraction éthanol/chloroforme sur un broya de foie et les protéines étaient bien dans la phase supérieur aqueuse.  [...]

Expériences en génétique…

Salut Piwi, merci de ta réponse. J'aimerai toutefois savoir si le morceau d'ADN, qui est intorduit, ne contient que le gène qui code la protéine en question Et comment isoler ce gène(la méthode d'extraction et la source de provenance) Je ne pense pas qu'on peut effectuer une telle expérience chez soi, même s'il l'on a un minimum de matériel, est-ce que je me trompe.  [...] Pour l'extraction d'ADN. quelques conseils. L'oignon c'est bien, mais ça sent fort. Je l'ai fait, et mes mains ont senti l'oignon pendant 3 jours... Ça marche très bien aussi avec la tomate ou le kiwi. En plus on voit mieux la différence entre la phase acqueuse rouge ou verte et la phase organique incolore.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

protocole Trizol marche bien en veg, sinon CTAB pour les récalcitrantes (genre riches en phenols) et si malgré ca tes ratios sont toujours mauvais, après l'extraction passe par une purification phenol-chloroforme et précipitation a l'ethanol.  [...] sinon faire un mélange avec methanol-chloroforme (récupérer la phase supérieur) suivi d'un mélange chloroforme (récuperer la phase supérieur) suivi d'une précipitation à l'acetate de sodium et ethanol (0.3M finaux d'acetate de Na, avec 2.5V de ethanol 99%, une heure a -20°, centrifuger récupérer le culot et le laver avec 250 microlitres ethanol 70%, centrifuger evacuer l'ethanol et resuspendre en eau-DEPC ) permet normalement d'avoir une bonne qualité d'ARN sans trop de pertes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

$récupérer les protéines apres extraction aux solvants organiques n'est pas le mieux. Je sais que l'hypophyse n'est pas énorme, mais l'idéal est d'extraire les ARN et protéines séparément.  [...] Après avoir récupéré la phase rouge contenant l'ADN et les protéines, on a ajouté 300µl d'éthanol 100% pour pr écipiter l'ADN. Après incubation 3mn, on centrifuge à 4600 tours pendant 5 mn. On pr élève la phase aqueuse à laquelle on ajoute 1ml d'isopropanol pour pr écipiter les protéines.  [...]

Isolat de protéines

Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature. Ce qui peut être plus adapté est de faire passer le lysat sur une colonne DEAE-Dextran, et ajouter une étape de traitement RNase/DNase. Mais pour ce qui est de la purification, beaucoup de méthodes peuvent être possible, à chacun ses techniques de prédilection.  [...] Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20). Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature.  [...]

[Identification] IPG strip gel combiner a une extraction au PBS

L'extraction classique utilise un tampon phosphate pour le broyage initial, je doute que cela soit ca du fait des lavages, ensuite les proteines sont precipites avec du TCA, laver avec de l'ethanol et remis en solution avec un tampon dont je n'ai pas la composition sous le coude (je suis en stage donc je ne connais pas encore toute les solutions exactement).  [...] question bête mais vous êtes-vous assuré que l'extraction avait bien marché Avez-vous fait un dosage et déposé suffisamment de protéines pour l'IPG.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème d'extraction d'ARN

A priori, une extraction au Trizol permet d'éviter les problèmes dus au mucus mais ça m'arrangerait vraiment d'utiliser le kit.  [...] Si je ne me trompe pas, les mucus sont généralement constitués de polysaccharides. Normalement dans les kits d'extraction d'ARN, il y a une étape de solubilisation dans de l'éthanol 70%. Essayes peut-être de répéter cette étape, qui permet en priorité de se débarrasser des protéines en les précipitant, mais cela peut peut-être aider à se débarrasser aussi des polysaccharides du mucus.  [...]

[Biologie Moléculaire] les ARNs et extraction

En tout cas j'ai compris ça de l'extraction à la guanidine. Donc la phase supérieur c'est de l'eau à pH neutre avec l'ARN Par contre on aurait pu en effet utiliser des Dnases, c'est vrai. J'en prends note pour l'amélioration de la technique.  [...] Autre p'tites questions. dans ce TP on n'a pas utilisé de phénol (élimine les protéines). Dans ce cas dans la phase aqueuse on a donc de l'ARN et des protéines, nan Ou alors la dénaturation des protéines par la guanidine fait que les protéines ne sont plus dans la phase supérieure.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction adn phénol/chloroforme

j'aurais besoin de connaitre le role du phénol, du chloroforme et de l'éthanol lors d'une extraction d'ADN. car j'ai l'impression qu'ils font tous la même chose. débarassé l'adn des débris lipidiques et des protéines.  [...] le phenol debarrasse des proteines, le chloropphorme des lipides et l'ethanol permet de precipiter l'ADN (en presence de sels et a froid).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et fluorescence...

Est ce que du DNAzol et de l'ethanol sont suffisant pour l'extraction A quoi sert la proteinase K QU est ce que t appelles (MaliciaR) un protocole maison.  [...] C'est un Ser-protéase qui hydrolyse les liaisons peptidiques au niveau des C-ter lorsque les aa les formant sont aliphatiques, aromatiques ou hydrophobes. Je l'ai utilisée dans des extractions d'ADN génomique bactérien et viral à partir de sang total et j'en ai de mauvais souvenirs au niveau des qPCR.  [...]