• Santé - Extraction, échantillon, Cellules

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je dois réaliser une extraction d'ADNg à partir de cellules de lignée lymphocytaire. Je possède déjà les culots cellulaires congelés, et j'ai déjà un protocole d'extraction phénol/choloroforme. Mon seul souci, c'est que je n'ai pas de tampon de lyse maison pour mes cellules, ni de protocole de lyse.  [...] Ensuite le volume à ajouter sur tes cellules est variable suivant le nombre de cellules, pour un nombre de cellules. 3.10^7 ajoute 0,3 ml de tampn de lyse et 1 ml si tu effectue ton extraction sur plus de cellules. Il te suffit ensuite d'incuber tes échantillon 12 à 18h à 50°C sous agitation dans des tubes bien fermés.  [...]

extraction et dosage des protéines totales

Je voudrais savoir quelle quantité de protéine on peut s'attendre à obtenir après extraction à partir de neurones. 1µg/million de cellules 1mg/million de cellules.  [...] J'ai lu plusieurs thèse où, après culture cellulaire, il faisait une extraction sur un échantillon de 1 000 000 de cellules (c'est courant j'ai l'impression) puis un dosage pour savoir la bonne quantité à déposer sur des gels de western-blot.  [...]

[Urgence] question

Il est vrai que ma question peut paraître un peu saugrenue mais comme je travaille sur de petits échantillons maximum 10000 cellules (et je dis bien maximum) prostatiques, j'ai quelques difficultés à extraire correctement mes ARNs je pense que je suis limite par rapport à mon kit d'extraction.  [...] Je sais qu'il existe des kit mini et midi pour l'exctraction. j'ai regardé sur le net, il existe effectivement un kit micro donc ca doit etre faisable. Essai de te le procurer ou koi et de garder un peu d'echantillon si des fois tu te viandes ^^.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN de cellules eucaryotes, lyse

dans l'exemple de cellules issues de l'épithélium de la bouche par exemple, quel traitement feriez-vous subir à votre échantillon pour extraire l'ADN.  [...] pour la suite du protocole d'extraction d'ADN, on utilise le phénol et le chlorophorme à partir de notre lysat cellulaire c'est bien ça ou bien doit-on préalablement centrifuger pour éliminer l'eau.  [...]

[Biologie Cellulaire] extraction protéique (ERK1/2) à partir de cellules U2OS

je suis un nouveau dans ce forum, j'ai un soucis, je voulais faire des culots cellulalires à partir des boites 35mm de cellules transfectées, la derniere fois javais pas beaucoup de prot en dosage lowri sachant bien que je gratte ma boite de cellules dans du PBS et je centrifuge 1000 RP 2min, après je lyse mes cellules dans du leamli 2X et je l'ai dose et ce que kelk'un pourrait me donner un protocol.  [...] j'ai une autre question differente je voulais peter un culot de cellules cultivées dans des boites 35mm j'utilise le grattage dans du PBS 1X la kestion à combien je centrifuge pour avoir un bon cult sachant que la derniere fois javais presque rien de materiel lors du dosage lowry.  [...]

[Biochimie] Casser des aggrégats

Je travail sur des cellules eucaryotes, après avoir fait une extraction protéique, j'ai dénaturé certains de mes échantillons à 95°C, le souci est que j'ai inversé les tubes et la protéine que je veux voir forme des aggrégats lorsqu'on la dénature à 95°C.  [...] Je ne vois pas ces aggrégats, je sais qu'ils sont là uniquement grâce au western blot, j'avais déja fais l'erreur de charger sur un gel les échantillons dénaturés à 95°C, mais là je me suis rendu compte de l'inversion de tube avant.  [...]

[Biochimie] Extraction ADN a partir d'un echantillon

Pensez-vous qu'il y ait des différences en extrayant l'ADN dans des échantillons d'une meme espece mais conservés différement (éthanol ou congelé).  [...] Pour l'ARN, comme selon les espèces et les types d'ARN, la demi vie peut être extrêmement varié mais peut n'être que de quelques minutes, oui la conservation aura une incidence. Je me suis jamais amusé à conservé des ARN dans de l'éthanol (sauf pour le précipiter) mais je ne suis pas sur que ce serait très efficace.   [...]

Extraction ARN/lipides à partir d'un même échantillon

Extraction ARN/lipides à partir d'un même échantillon.  [...] Bonjour, je souhaiterai savoir si quelqu'un connait un protocole permettant d'extraire à partir d'un unique échantillon ARN et lipides en même temps, l'échantillon étant de très faible quantité.  [...]

[Biotechnologie] Pb profiles electrophoretiques de proteines decales

Je travaille actuellement sur un appareil utilisant un systeme de plaque avec puits (10 puits pour echantillon et un puit pour le ladder) pour realiser des migrations de proteines (hordeine).  [...] Apres migration des proteines, j'obtiens des profils electrophoretiques de l'echantillon en cours d'analyse. le pb que je rencontre.  [...]

Différence RT_PCR semi-quantitative et Q-PCR

- pour l'extraction des ARNm. est il possible de conserver les culots de cellules pendant quelques semaines à -80°C avant de faire l'extraction ou cela risque t'il d'abimer les ARN.  [...] il m'arrive qd je suis un peu la bourre dans les manips, de congele (-80°C)r mes cellules dans le tampon d'extraction utiliser lors de la purification d'ARN (tampon RLT du kit RNeasy de chez qiagen).  [...]