• Santé - Extraction, Classique, Précipitation, ADN

[Biochimie] TPE sur l'ADN

*l'extraction classique par phénol/chloroforme et précipitation de l'ADN (par EtOH).  [...] Je rajoute une petite précision sur ces extractions. elles sont souvent réalisées à partir de traces et ont donc un plus faible rendement. En cause. la faible quantité d'ADN et une plus ou moins bonne qualité (dégradation, mélanges, inhibiteurs de PCR, etc).  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

Essaye un protocole d'extraction d'ADN classique, lyse avec un détergeant, puis précipitation a l'alcool. Si tu manipules proprement alors tu auras de l'ADN et de l'ARN.  [...] J'ai fait des extractions d'ARN dans ma jeunesse avec du phénol Chloroforme-alcool isoamylique mélange 1/1 et ça marchait très bien. Problème c'est long, assez lourd et les quantités récupérées sont certes impressionnantes mais pas reproductibles.  [...]

extraction phénol chloroforme

L'extraction phenol/chloroforme (ou old school ) ne permet pas à elle seule de faire une extraction d'ADN. Il faut faire une lyse des cellules (lyse alcaline ou pk ou...) et d'autres étapes d'extraction/purification/précipitation/lavages peuvent être ajoutées.  [...] L'extraction phénol ne permet que de laver ton ADN préparé en le débarassant des protéines (jusqu'à un certain point)... reste plus qu'a faire une extraction chloroforme pour enlever le phenol qui est dissout dans la phase acqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précaution pour etude méthylation ADN

quand je l'ai fais, je n'avais rien de très particulier sinon que je n'ai jamais vortexé pour éviter de casser l'ADN. Toutes les agitations ont été faites à la main.  [...] Merci pour vos réponses, c'est ce que je fais tout le temps avec mes ADN donc çà devrait aller. Je pensais qu'il y avait peut être des techniques d'extraction, ou de précipitation particulière.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN, chromatine, ... Mises en évidence expérimentales.

2/A ce propos, comment se fait il que l'extraction de l'ADN, qui utilise quand même des procédés assez violents il me semble. choc osmotique+centrifugation, ou détergent+sels+réaction de précipitation), ne change pas la conformation qu'il avait initialement dans la cellule.  [...] 6/ Dans d'autres chapitres, on nous parle souvent de l'observation d'un gène pour lequel on a forcé l'expression. mais comment procède-ton. on injecte de l'ADN répliqué (par PCR, ou autre technique de génie génétique) dans un noyau de cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Question purification QIAprep

Il y a aussi la quantité de plasmides qui entre en compte. Je ne sais pas comment tu fais tes preps, nous, nous utilisons le kit Xtra midi. Le principe est une colonne et un filtre (classique pour ce genre de kit). Le truc c'est que si tu charges trop de bactéries tu satures la colonne et ton extraction n'est pas terrible.  [...] Edit. J'ajouterai que c'est une manip un peu ancienne, et que souvent l'ADN est de mauvaise qualite... generalement on fait ca pour economiser un peu d'argent en faisant une miniprep au lieu d'une maxi prep. Si c'est l'argent ton probleme, tu peux faire une extraction phenol/chloroforme (jusqua la precipitation), puis echainer avec une miniprep pour bien purifier ton ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] Et bien en fait cela dépend également du but de ta manipulation. Si tu fait une extraction d'ADN pour faire une PCR conventionnelle derrière, le fait qu'il y ait un peu d'ARN n'est pas vraiment grave. Puisque seul les ADN seront amplifié (je grossis la chose).  [...]

Extraction de l'ADN

[COLOR= Plum ]Bonjours,je voudrais savroir pour quoi au cours de l'extraction de l'ADN génomique d'Arabidopsis thaliana.aprés broyage du tissu et la mises de la solution de lyse,pour précipitation des protéines,on doit incuber le mélange dans une étuve et pour quoi exactement à 65°C [/COLOR ].  [...] Peut-être est-ce une température suffisante pour dénaturer les protéines partiellement tout en restant inférieur au Tm de ton ADN.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

.. mais à mon avis le gros problème avec l'extraction d'ADN à la maison c'est les contaminations. Chez nous, malgré les précautions prises, ce n'est pas du tout rare alors dans une cuisine.  [...] Pour l'éthanol, au labo, on en a deux sortes. L'éthanol 100% classique (en fait 99%), que l'on utilise pour les tampons etc... Et l'éthanol ultra pure (99,999% certifié) pour les manips les plus précieuses (précipitation de l'ADN par exemple). Et je confirme que le méthanol est de moins en moins utilisé, à cause des coups de son élimination (toxique, donc pas dans l'évier.).  [...]

[Biologie Moléculaire] les ARNs et extraction

En fait le protocole est fait de manière classique. Extraction au chloroforme d'environ 5 millions de cellules. récupération de la phase aqueuse, centrifugation et lavage et précipitation a l'éthanol. on redissoud le culot dans 10 µL d'eau. on a un rapport de pureté a peu près de 1.  [...] merci piwi mais je n'arrive pas à avoir la publication il faut un login. Quelqu'un connaît t-il le rôle de l'extraction à la guanidine/NaCl + chloroforme seulement. j'comprends pas bien où sont les protéines, l'ARN et l'ADN. à priori vu que le pH est basique l'ADN restera préférentiellement dans la phase inférieure. merci.  [...]