• Santé - Extraction, Classique, Précipitation, ADN

[Biochimie] TPE sur l'ADN

*l'extraction classique par phénol/chloroforme et précipitation de l'ADN (par EtOH).  [...] La technique est légèrement différente des précédentes avec l'emploi notemment de DTT pour séparer correctement les deux fractions.   [...]

extraction phénol chloroforme

L'extraction phenol/chloroforme (ou old school ) ne permet pas à elle seule de faire une extraction d'ADN. Il faut faire une lyse des cellules (lyse alcaline ou pk ou...) et d'autres étapes d'extraction/purification/précipitation/lavages peuvent être ajoutées.  [...] L'extraction phénol ne permet que de laver ton ADN préparé en le débarassant des protéines (jusqu'à un certain point)... reste plus qu'a faire une extraction chloroforme pour enlever le phenol qui est dissout dans la phase acqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

En ce qui concerne l'extraction d'ADN, sous quelle forme on obtient notre ADN vers la fin du protocole d'extraction (precipitation à l'éthanol).Autrement dit, est-ce qu'on est obligé d'obtenir de l'ADN sous forme de pelote ou bien ce n'est pas toujours le cas.  [...] Personnellement j'ai extrait de l'ADN génomique du soja par les méthodes classiques basées sur l'utilisation de détergent (CTAB et SDS ) par deux protocoles différents et dans les deux cas j'ai obtenu un précipité sous forme d'écaille. je n'ai pas compris qu'on est-ce que on obtient une pelote d'ADN et quelle est la relation entre la forme et le degré de contamination de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précaution pour etude méthylation ADN

quand je l'ai fais, je n'avais rien de très particulier sinon que je n'ai jamais vortexé pour éviter de casser l'ADN. Toutes les agitations ont été faites à la main.  [...] Merci pour vos réponses, c'est ce que je fais tout le temps avec mes ADN donc çà devrait aller. Je pensais qu'il y avait peut être des techniques d'extraction, ou de précipitation particulière.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] Et bien en fait cela dépend également du but de ta manipulation. Si tu fait une extraction d'ADN pour faire une PCR conventionnelle derrière, le fait qu'il y ait un peu d'ARN n'est pas vraiment grave. Puisque seul les ADN seront amplifié (je grossis la chose).  [...]

[Biologie Moléculaire] Question purification QIAprep

Il y a aussi la quantité de plasmides qui entre en compte. Je ne sais pas comment tu fais tes preps, nous, nous utilisons le kit Xtra midi. Le principe est une colonne et un filtre (classique pour ce genre de kit). Le truc c'est que si tu charges trop de bactéries tu satures la colonne et ton extraction n'est pas terrible.  [...] Edit. J'ajouterai que c'est une manip un peu ancienne, et que souvent l'ADN est de mauvaise qualite... generalement on fait ca pour economiser un peu d'argent en faisant une miniprep au lieu d'une maxi prep. Si c'est l'argent ton probleme, tu peux faire une extraction phenol/chloroforme (jusqua la precipitation), puis echainer avec une miniprep pour bien purifier ton ADN.  [...]

Extraction de l'ADN

[COLOR= Plum ]Bonjours,je voudrais savroir pour quoi au cours de l'extraction de l'ADN génomique d'Arabidopsis thaliana.aprés broyage du tissu et la mises de la solution de lyse,pour précipitation des protéines,on doit incuber le mélange dans une étuve et pour quoi exactement à 65°C [/COLOR ].  [...] Peut-être est-ce une température suffisante pour dénaturer les protéines partiellement tout en restant inférieur au Tm de ton ADN.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour l'éthanol, au labo, on en a deux sortes. L'éthanol 100% classique (en fait 99%), que l'on utilise pour les tampons etc... Et l'éthanol ultra pure (99,999% certifié) pour les manips les plus précieuses (précipitation de l'ADN par exemple). Et je confirme que le méthanol est de moins en moins utilisé, à cause des coups de son élimination (toxique, donc pas dans l'évier.).  [...] Le plus long est l'étape d'extraction de l'ADN, car il faut un temps d'attente d'une nuit (environ 16h). Puis l'extraction en elle même n'est pas spécialement longue (2-3h). Dans mon ancien labo, on préférait que l'ADN se re-suspendre après purification sur la nuit également, à 4°C, mais cela n'est pas obligatoire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

Idée un peu simple pour tester l'extraction. hydrolyse complète, puis voir au chlorure d'argent si on aurait une précipitation Ag 3 PO 4.  [...] Les petits polyphénols peuvent peut-être dénaturer les enzymes (). Mais en principe ils devraient rester dans la phase organique de l'extraction... Pour les polysaccharides, certains peuvent peut-être agir comme inhibiteurs compétifis (). Cependant en concentrant l'ADN par précipitation, j'imagine qu'on élimine pas mal de ces polymères osidiques avec l'éluant.  [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse.  [...] Tu aurais une référence sur ce que tu dit (pour pouvoir intégrer cette donéne dans une rédaction tout en jsutifiant la source).   [...]