• Santé - Extraction, ARN, Séquence

[Biochimie] Expression protéique

Le fait que l'ARNm soit présent n'indique pas grand chose, sauf qu'effectivement ton promoteur fonctionne correctement. Il se peut que ta séquence soit mutée conduisant a un mauvais repliement et à l'élimination de la protéine avant même sa mise en fonction. As tu séquencé ta séquence d'adn.  [...] La séquence cloné a été séquencé et est correcte en revanche ce que je n'ai aps séquencé c'est le cDNA issu de l'extraction ARN mais je doute qu'il y ai un problème dans la séquence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquençage

Quand on effectue un séquençage à haut débit (NGS) on obtient donc la séquence ADN de tout le génome =. Prise de sang - Extraction ADN génomique - Purification - PCR - NGS.  [...] Si maintenant on veut obtenir toute la séquence ARN d'un organe en particulier, comme le foie, quel est le protocole expérimental =. Biopsie du foie - Extraction ARN - purification - PCR - NGS Si on comparait cette séquence avec la.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction des ARN par la méthode phénol/chloroforme

j'aurais une petite question au sujet de l'extraction des ARN totaux par la méthode au phénol chloroforme.  [...] Le seul rôle que je connais pour le chlorure de césium, c'est la centrifugation par gradient mais ce n'est pas une obligation pour une phénol / chlo.   [...]

[Biologie Moléculaire] Difficultés pour solubiliser de l'arn

Suite à une extraction d'ARN totaux à partir de larves de Trichinella (nématode) j'ai des difficultés pour ressolubiliser mon ARN. Mon protocole est basé sur une extraction classique au phénol-chloroforme et à la fin un lavage à l'éthanol 75% et séchage. Le séchage de mon culot s'est fait en étuve à +37°C puis resupension dans de l'eau Rnases free.  [...] En fait j'ai réussi à ressolubiliser une partie de mon culot en refaisant une extraction phénol-chlo. Néanmoins, il me reste une partie insoluble. Pensez-vous que pour faire ma banque d'ADNc je devrais refaire une extraction où je peux travailler avec mon culot dissout En gros, j'ai peur que ne se sont dissoutes que certaines catégories d'ARN, lesquelles je ne sais pas mais c'est possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

Salut. j'utilise habituelement l'extraction phenol/chlorophorme et glycogene pour extraire les arn des mes cultures cellulaires.. et le rendement est amliore, pas de facon faramiseuse, mais il y a une difference qui justifie l'achat.  [...] Pour répondre à Greg concernant mes quantités et protocoles, je ne travaille pas sur des cellules mais sur de l'ARN circulant dans le sang d'où les faibles quantités obtenues et la fragilité des ARN. J'ai utilisé la méthode d'extraction au Trizol puis passage sur une colonne rneasy mini kit.  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

Je viens de terminer pour la 6ème fois mon extraction d'ARN totaux à partir de cerveaux de souris par la méthode du Trizol puis Chloroforme et j'ai toujours le même problème. Au final, j'ai une très faible concentration d'ARN (de l'ordre de 200ng/µL).  [...] Ensuite le kit fonctionne par liaison des ARN sur une colonne, au final la pureté convient à tout type d'application (donc pas besoin de purif supplémentaire).  [...]

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

après avoir cherché à plusieurs reprises sur internet, je n'ai pas réussi à trouver le rôle de l'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN.  [...] Si mes souvenirs sont bons, une fois qu'on a une interface claire après les lavages au phénol, on met de l'acétone avec notre solution d'ARN, on la laisse au froid toute la nuit puis on centrifuge longtemps à forte vitesse pour précipiter l'ARN. On obtient alors un culot qui ne contient que l'ARN q'on sèche alors par 1 ou 2 lavages à l'éthanol.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

J'ai effectué une extraction d'ARN à partir des cellules THP-1 humaines par deux techniques différentes. la technique d'extraction par précipitation en utilisant le trizol et la technique par extraction par colonne utilisant le kit direct-zol ARN miniprep et des colonnes appel zymo-Spin IIC.  [...] Le début de l'extraction est très important. conditions d'homogénéisation (mécanique, chimique), il faut se mettre à froid, ainsi que la quantité de matériel (trop est pire que pas assez.). Comment avez vous procédé.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol).  [...] J'ai fait des extractions d'ARN dans ma jeunesse avec du phénol Chloroforme-alcool isoamylique mélange 1/1 et ça marchait très bien. Problème c'est long, assez lourd et les quantités récupérées sont certes impressionnantes mais pas reproductibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

Sinon tu peux les repasser sur ta colonne d'extraction, par contre, tu risques de perdre au niveau rendement d'ARN alors tout dépend de ta concentration. Si tu précipites à l'isopropanol, tu risques également de perdre de l'ARN mais si il t'en reste suffisamment pour réaliser une RT PCR ça devrait aller.  [...] Le RNA later permet d'éviter la dégradation des arn lors de la décongélation. C'est utile si tu dois couper un certain poids pour l'extraction ou disséquer certaines parties et que ça prend un peu de temps sinon il faut couper sur de la carbo. J'ai fait des tests sur la qualité de l'ARN.  [...]