• Santé - Extraction, ARN, Lipides, échantillon

Extraction ARN/lipides à partir d'un même échantillon

Extraction ARN/lipides à partir d'un même échantillon.  [...] Bonjour, je souhaiterai savoir si quelqu'un connait un protocole permettant d'extraire à partir d'un unique échantillon ARN et lipides en même temps, l'échantillon étant de très faible quantité.  [...]

Purif d'ARN par le tryzol

Donc en gros ca te sert a te debarrasser des proteines et des lipides qui sont present lors de l'extraction des ARN. CA inactive aussi les RNAse, ce qui est bien pratique si tu ne veux pas recuperer a la fin des nucleotides libres.  [...] Donc en gros ca te sert a te debarrasser des proteines et des lipides qui sont present lors de l'extraction des ARN. CA inactive aussi les RNAse.  [...]

[Biochimie] DO 260/280 et 260/230

Je suis en pleine extraction d'ARN a partir d'échantillon vegetaux.  [...] Maintenant si ta question est Pourquoi on peut pas avoir un rapport de 10'000 si on a pas du tout de contaminant, alors là, sauf erreur de ma part, et c'est pourquoi j'ai accentué le MAJORITAIREMENT, c'est que les acides nucléiques absorbent aussi un petit peu à 230 ou 280, ce qui fait que la mesure de l'absorbtion à 230 ou 280 n'est jamais de 0.   [...]

une seul bande d'ARN visible voir deux...

Avec difficultés j'ai pu voir une deusieme bande mais très faible. Cela pourrait il venir de la concentration trop élevé de mon échantillon de départ (avant extraction de l'ARN).  [...] Si tu n'as rien en bas de ton gel il est peu probable que tout se dégrade. Il est possible que tes echantillons soient trop concentrés, essaye de les diluer 10 et 50 fois et redepose sur gel. La derniere fois que j'ai fait ca j'ai vu mes beaux ARNr apparaitre c'etait magique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème PCR : Besoin d'aide

quand j'utilise l'ARN synthétique que l'on ma fourni comme Témoin Positif, j'ai une bande, mais quand j'utilise mes échantillons de terrains, je n'ia pas de bande... mais je ne l'ai encore fait que sur un seul échantillon... je vais réessayer. merci beaucoup en tout cas.  [...] 1) Je fais une extraction d'ARN (trizol chloroform) sur échantillon de sang (bovin ou ovin). J'extrais donc l'ARN de l'hôte + l'ARN viral (s'il est présent).  [...]

[Biologie Moléculaire] EXTRACTION ARNt

Bonsoir, je viens de me lancer dans des expériences d'extraction d'ARNt à partir du sang total.dans ma première extraction j'ai obtenu un randement de 2,1 (DO260=0,069) avec une concentration de 69ug/ml qui me parrait faible. dans l'étape de rétrotranscription selon le protocol je dois prendre 1ug/ul d'ARN alors que mon échantillon a une concentration faible(0,069ug/ul), je ne sais pas quoi faire dans ce cas, est-ce que je peux doubler de volume pour régler ce probleme.  [...] une autre question me préoccupe, la valeur de 69 est la concentration, alors comment déterminer la quantité de mon ARNt.   [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

Pour répondre à Greg concernant mes quantités et protocoles, je ne travaille pas sur des cellules mais sur de l'ARN circulant dans le sang d'où les faibles quantités obtenues et la fragilité des ARN. J'ai utilisé la méthode d'extraction au Trizol puis passage sur une colonne rneasy mini kit.  [...] Nous sommes un labo qui travaille de façon quotidienne avec de l'ARN (transcrits in vitro, extraction d'ARN, etc) et nous n'utilisons jamais de DEPC, juste des solutions autoclavées. Même les bacs à gels traînent à l'air libre, sans nettoyage. Il n'arrive qu'extrêmement rarement des dégradations, et d'habitude c'est dû à une contamination accidentelle de notre faute.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai juste remarqué qu'en travaillant sur des échantillons congelés dans le TRIzol, j'avais un meilleur rendement que si je les traitais de suite après le prélèvement. Le fait de chauffer les échantillons pour favoriser la dissolution des sels avant extraction augmenterai mon extraction d'ARN.  [...] Juste pour vous dire que j'ai retenté une extraction d'ARN en faisant un lavage supplémentaire au chloroforme et mon rapport DO 260/230 est passé de 0,4 à 1 donc nette amélioration. J'ai dû cependant compenser la perte de rendement d'ARN en partant d'une quantité d'échantillon de 30% supérieure.  [...]

Calcul de ratios en real time RTqPCR: Combinaison de gènes de référence.

J'étudie le niveau d'expression d'un gène A, j'ai à ma disposition 40 échantillons (d'ARN total issu d'extraction). Je ne peux passer que 10 échantillons par série sur les machines de RT qPCR. Je dois donc les passer en 4 fois. Pour homogénéiser les differentes séries, je dispose d'un échantillon calibrateur que j'utilise à chaque série de RTqPCR.  [...] Je me suis rendu compte que le niveau d'expression en ARN de GAPDH n'est pas stable d'un échantillon à l'autre, j'ai ajouté deux autres gènes de référence (ESD et PLOR2A).  [...]

pb dépots echantillons d'ARN

Après avoir réaliser une extraction d'ARN de bacteries issue de l'eau avec un kit QIAGEN, je dépose mes échantillons avec du bleu de dépot pour ARN et là se produit une chose pas courante. Au lieu de que mon échantillon se retrouve au fond de mon puit (gel 2,5% agarose et tampon TE 1X tout a fait normal), celui ci se voit revenir à la surface et se dissipe dd'un coup dans mon gel.  [...] En general cela se produit quand on s'est trompé de tampon d'electrophorese, typiquement quand on utilise une solution 10X au lieu d'1X. Sinon il peut rester des traces d'alcool dans l'echantillon ce qui fait remonter l'echantillon a la surface... un grand classique aussi.  [...]