• Santé - Extraction, ARN, éthanol

[Biologie Moléculaire] Difficultés pour solubiliser de l'arn

Suite à une extraction d'ARN totaux à partir de larves de Trichinella (nématode) j'ai des difficultés pour ressolubiliser mon ARN. Mon protocole est basé sur une extraction classique au phénol-chloroforme et à la fin un lavage à l'éthanol 75% et séchage. Le séchage de mon culot s'est fait en étuve à +37°C puis resupension dans de l'eau Rnases free.  [...] En fait j'ai réussi à ressolubiliser une partie de mon culot en refaisant une extraction phénol-chlo. Néanmoins, il me reste une partie insoluble. Pensez-vous que pour faire ma banque d'ADNc je devrais refaire une extraction où je peux travailler avec mon culot dissout En gros, j'ai peur que ne se sont dissoutes que certaines catégories d'ARN, lesquelles je ne sais pas mais c'est possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

je travaille actuellement sur l'extraction d'ARN à partir des leucocytes. j'ai pu avoir de bons rapport DO260/280 mais le probléme que j'ai conserne l'absorbance à 230 nm qui est trés élevée et donc mes rapports 260/230 sont trop faibles (0,...). Je sais que ceci peut être due à une contamination par le phénol mais j'aimrais savoir s'il existe d'autres explications à ça et est ce que l'éthanol absorbe à 230 nm.  [...] J'ai également une absorbance à 230 nm élevée avec mon extraction d'ARN au TRIzol. J'ai lu aussi que c'était surtout une contamination en sels et partiellement au phénol mais pas à l'éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème d'extraction d'ARN

A priori, une extraction au Trizol permet d'éviter les problèmes dus au mucus mais ça m'arrangerait vraiment d'utiliser le kit.  [...] Si je ne me trompe pas, les mucus sont généralement constitués de polysaccharides. Normalement dans les kits d'extraction d'ARN, il y a une étape de solubilisation dans de l'éthanol 70%. Essayes peut-être de répéter cette étape, qui permet en priorité de se débarrasser des protéines en les précipitant, mais cela peut peut-être aider à se débarrasser aussi des polysaccharides du mucus.  [...]

[Biochimie] extraction ADN et ARN

je souhaiterais avoir quelques renseignements au sujet de différentes solutions utilisées pour l'extraction de l'ADN et de l'ARN.  [...] Pour l'éthanol, tout dépend de la technique d'extraction que tu utilises, si tu utilises des colonnes, ça améliore la fixation de l'ARN à la colonne (et sa sélectivité), j'imagine que c'est pareil pour l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et fluorescence...

Est ce que du DNAzol et de l'ethanol sont suffisant pour l'extraction A quoi sert la proteinase K QU est ce que t appelles (MaliciaR) un protocole maison.  [...] 3*10 3 pb). Donc, suivant ces tailles, tu utilises des méthodes d'extraction différentes (phénol-chlorophorme pour l'ADN génomique et lyse alcaline (ou miniprep) pour le plasmidique, très habituellement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Ensuite, il s'agit de précipiter les ARN, on incube avec de l'isopropanol, à quoi sert t'il dans la précipitation Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre.  [...] Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Culot d'arn

pourquoi faut-il laver les culots d'ARN avec de l'éthanol à 70% et non avec de l'éthanol pur.  [...] pour redissoudre une partie des sels qui ont servis a la precipitation. Idem avec l'ADN.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction des acides nucléiques

J'ai un petit problème en TP de biologie moléculaire, c'est lors de l'extraction de l'ADN et de l'ARN. Mes questions.  [...] 1-pourquoi utiliser isopropanol au lieu de l'éthanol lors des extraction.  [...]

inhibiteurs de la qPCR

Pour les autres inhibiteurs, cela va dépendre également de la méthode d'extraction utilisée (concentration en sel, résidus de solvamts,...).  [...] C'est l'ADN génomique d'un insecte (une mouche gallifère ). L'extraction d'ADN avec le CTAB n' a pas marché donc j'ai suivi le protocole du salting out ( precipitation des débris cellulaires avec le NaCl et lavage avec l'ethanol absolu pus l'ethanol 70).  [...]

[Génétique] meilleur conservateur d'ADN

L'ethanol 70% à -20°C est très bien pour conserver l'ADN. Ceci dit, si tu ne conserves les tissus que pour en extraire l'ADN, à ta place, je ferais deja une extraction, je pelotterais l'ADN et je le conserverais ainsi à -20°C, flottant dans l'ethanol.  [...] (j 'utilise actuellement des tissus ages de 1 an pour faire des analyses d'ARN, ADN, proteines... et apres confirmation de la qualite, rien n'a bouge...).  [...]