• Santé - Extraction, ARN, Cellules

Différence RT_PCR semi-quantitative et Q-PCR

- pour l'extraction des ARNm. est il possible de conserver les culots de cellules pendant quelques semaines à -80°C avant de faire l'extraction ou cela risque t'il d'abimer les ARN.  [...] il m'arrive qd je suis un peu la bourre dans les manips, de congele (-80°C)r mes cellules dans le tampon d'extraction utiliser lors de la purification d'ARN (tampon RLT du kit RNeasy de chez qiagen).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ARN+ RT-PCR

Je suis nouvelle dans le domaine de la biologie moléculaire. Je vais faire l'extraction de l'ARN à partir des biopsies et des cellules pour faire par la suite une RT-PCR. Je n'arrive pas a choisir le Kit d'extraction d'ARN et de la RT-PCR. En se basant sur votre expérience pouvez vous me recommender les kit qui me permettent d'extraire mon ARN (en bonne qualité) et pour faire ensuite RT-PCR.  [...] Je connais quelqu'un qui utilisait le kit de MP (ex-Qbiogen) Pro RNA avec la machine FastPrep, réputée pour sa grande efficacité dans la lyse des tissus les plus robustes, pour obtenir des ARN de cellules de poumons et autres tissus humains. Les ARN obtenus sont de bonne qualité (Confirmé par analyse Agilent) et en bonne concentration, les protocoles rapides (moins qu'une colonne par contre) et on peut faire des analyses transcriptionelles pr écises derrières.  [...]

[Biologie Cellulaire] Rôle de la colchicine.

On a traité des cellules bêta pancréatiques à la colchicine et extrait leur ARN. Grâce à cet ARN, on a obtenu l'ADNc et on a fait une électrophorèse suite à une PCR ayant isolé et amplifié le gène TRPV4.  [...] On a fait une extraction d'ARN de cellules pancréatiques traitées et de cellules non traitées à la colchicine. On a mis cet ARN au congélateur pour la séance suivante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

j'essaye de mettre au point une extraction d'ARN sur des échantillons d'urine. Mon seul soucis, c'est que la quantité récupérée avoisine les 3ng/µl... Travaillant d'habitude sur des cellules, je n'ai pas l'habitude de travailler avec des prélèvements tels que l'urine.  [...] Si vous tenez vraiment à analyser l'ARN (de quelle facon d'ailleurs ), il faudra travailler sur de grands volumes, récupérer le peu de cellules (par ex en centrifugation) avant l'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN Lignée cellulaire et Bactérie

J'aimerai profiter de votre savoir vis à vis de l'extraction d'ARNm dans le cas suivant. Je vais mettre en culture des bactéries (lactique) sur des cellules (HT-29) pendant quelque. En fin de cinétique j'aimerai pouvoir isoler l'ARN Bactérien ainsi que l'ARN eucaryotes.  [...] J'ai regardé un peu ce qui se fait et bien souvent, il s'agit d'une extraction ARN classique qui inclue les deux ARN. J'ai également remarqué qu'il était aussi possible d'éliminer 90% de l'ARN eucaryotes avec un système de colonne mais là j'avoue que j'ai peur du prix (je me trompe peu être). Enfin bref qu'es qui vous semblent le mieux.  [...]

MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

je travailles sur des cellules MCF7 de cancer mammaire humain donc eucaryote. après mon extraction d'ARN et migration sur gel j'observe 3 bandes or je n'attends que 2 bandes correspondant aux ARN r 18S et 28S.  [...] non ce que je ne comprend pas c'est la 3 ème bande obsérvé lors de mes dépots d'ARN extrait dans chacun de mes échantillons pour n'importe quel puit.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

Salut. j'utilise habituelement l'extraction phenol/chlorophorme et glycogene pour extraire les arn des mes cultures cellulaires.. et le rendement est amliore, pas de facon faramiseuse, mais il y a une difference qui justifie l'achat.  [...] Pour répondre à Greg concernant mes quantités et protocoles, je ne travaille pas sur des cellules mais sur de l'ARN circulant dans le sang d'où les faibles quantités obtenues et la fragilité des ARN. J'ai utilisé la méthode d'extraction au Trizol puis passage sur une colonne rneasy mini kit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

En fait, j'ai vérifié toutes les étapes depuis l'extraction de l'ARN jusqu'au fractionnement... j'ai aussi vérifié la compétence de mes cellules... toujours aucune colonies sur boite.  [...] Apparemment c'est la ligation qui bloque... en utilisant une ligase différente de celle du kit et en étalant les cellules après centrifugation (concentrées) je me suis rendue compte qu'il y a des colonies sur ma boite.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction ARN

Le problème c'est que ma proteine d'interet est produite uniquement lorsque ma bactérie pousse sur gélose. Je suppose donc avoir des transcrit uniquement dans cette situation. Je me suis penché un peu sur la question et je me demandais si c'est pas trop casse-gueule de récupérer mes cellules sur la gélose.  [...] c'est vrai qu'en terme de quantité ca devrai pas poser pb. Mais pour récup les cellules je fait comment Un peu de tampon et je gratouille C'est vrai que j'ai pas de reel pb mais je venais surtout a la recherche de petit truc technique. Sinon effectivement ce que je voudrai c'est voir si les ARN sont la pour confirmer les structures opéroniques de mon cluster.  [...]

[Urgence] question

Voilà mon problème je microdissèque des cellules cancéreuses de prostate et je me demandais quelle était la quantité d'ARN dans une seule de ces cellules. Comme je fasi de l'extraction avec passage sur puce ensuite, cela m'aidera beaucoup.  [...] Il est vrai que ma question peut paraître un peu saugrenue mais comme je travaille sur de petits échantillons maximum 10000 cellules (et je dis bien maximum) prostatiques, j'ai quelques difficultés à extraire correctement mes ARNs je pense que je suis limite par rapport à mon kit d'extraction.  [...]