• Santé - Extraction, ADN, Transformation

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

contrôle-qualité de l'ADN recombinant. transformation dans E. coli, sélection des clones recombinants et extraction du vecteur d'expression.  [...] Ensuite, une fois que tu as tout ça, tu transformes pour voir des phénotypes associés à des mutations, des sauvetages de phénotypes ou ce que tu cherches De toute façon, tu conserveras ton ADN en tube après son extraction, pas dans des cellules.  [...]

L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure

Les arn et les protéines dénaturées lysées (on fait agir une protéase pour éviter que les nucléases ne détériorent ton ADN) sont récupérés dans une première fraction, on élue ensuite l'adn en diminuant la force ionique.  [...] Sinon dans un tampon général pour l'extraction d'ADN, j'ai du TritonX-100 je sais que dans certain cas d'immunocytochimie c'est pour éviter que les molécules d'eau s'adsorbent sur une surface en verre mais là.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

La seule chose que je peux te dire c'est que la manip de transformation des bactéries par le vecteur seul a raté, et qu'un très faible nombre de colonies a donc pu se développer. Par curiosité, combien de colonies par µg d'ADN as tu obtenu dans le contrôle et dans la transformation avec vecteur + insert.  [...] En ce qui concerne l'efficacité de ta transformation (vecteur+insert) elle n'est que de 13.10^3 bactéries transformées/µg d'ADN ce qui est faible (une valeur de 10^6 est en général souhaitable).  [...]

bactéries (reproduction)

TRANSFORMATION = transformation d'1 ADN étranger dans 1 bactérie par l'intermediare d'1 vecteur.  [...] Cette classification date de 1968 (N.E. Gibbons et R.G.E. Murray ). On l'utilise tellement en cours de licence (et probablement autant à al rentrée en maitrise ) que c'est devenu un automatisme.   [...]

[Biologie Cellulaire] transfert des gènes de résistances

Transformation bactérienne. Une bactérie meurt, son ADN est relarguer dans le milieu et une autre bactérie adsorbe cette ADN puis l'intégre a son génome. ADN portant potentiellement de tel génes de résistances.  [...] Tout ces mécanismes de transfert horizontale de géne peuvent aboutir à l'acquisition de géne de résistance par les bactéries.   [...]

[Evolution] Evolution de la reproduction aséxuée

Et je suis même persuadé qu'au début ça devait échanger des gènes dans tous les sens. La reproduction asexuée aura été une sorte de holà mis aux transferts.   [...] Je suis d'accord avec Alphreta. d'une part sexualité c'est bien la reproduction entre 2 êtres de sexe différents, et de 2 si tu parles d'echange de gènes entre 2 entités, c'est un transfert horizontal.   [...]

[Biologie Cellulaire] gène qui s'intégre au chromosome

Rarement peut-être, mais dans le cas de la transformation, l'ADN bicaténaire est dégradé par un exonucléase. Un unique brin pénètre le cytoplasme et s'intègre au chromosome bactérien (si les bactéries sont d'espéces proches).  [...] Je veux dire par là, qu'il est dit que les bactéries peuvent acquérir de nouveaux gènes de résistance lors de la transformation. Or, le problème énoncé plus haut m'amène à me demander qu'est-ce qui rajoute des nucléotides complémentaires au gène rajouté ou est-ce que ça ne pose aucun problème qu'il y ait un trou dans la séquence d'ADN.  [...]

Pathogénicité bactérienne

pouvoir invasif (résistance à la phagocytose, pénétration par transcytose au niveau des cellules M, passage de la barrière encephalohématique, etc).   [...] Après ca si tu as besoin d'indications plus précises je pourrais te donner des informations sur les bactéries pathogènes alimentaires (listeria, staphylococcus...).   [...]

transformation e.coli par le plasmide pglo

Tu fais ta transfo (tu la fait bien biensur sinon ça risque pas de marcher) puis tu incube overnight. Et le lendemain tu compte le nombre de colonie positives en fonction de ta selection puis tu calcul la quantité de plasmide que tu a utilisé pour la transfo.   [...] Là tu es donc à 0.05µg/µl (puisque j'ai considéré que tes 400µg d'eau stérile c'est enfaite 400µl d'eau stérile LOL) Et donc si ta fait la transfo classique 10µl plasmide + 40µl cellules alors ta étalé 0.5µg de plasmide. Donc si t'a compté 600 colonies admettons, alors l'efficacité c'est.   [...]

Problem:vecteur contenant GFP ne fluore pas

j'ai crée un vecteur. promoteur 35S, suivi de l'ADN de ma proteine d'interet, suivi de GFP4. J'ai transformé mes petites Arabidopsis, ai sélectionné les transformées.. les ai observées avec microscope confocal..... et rien...aucun signe de fluorescence. je ne comprends pas.  [...] Rebondissement. j'ai fait une extraction DNA, suivie d'une PCR pour déterminer si mes plantes -resistantes à BAsta, je tiens à le préciser..- contenait 35Scassette/proteine/GFP... le vide complet. apparemment ma transformation n'a pas fonctionné. GFP n'est pas en cause.  [...]