• Santé - Extraction, ADN, Silice

Problème d'extraction d'ADN

Je me permet de vous solliciter pour un problème d'extraction d'ADN que j'ai rencontrer. J'utilise la méthode d'extraction sur colonne de gel de silice à partir de prélèvement de sang total congelé. Le hic, c'est en voulant décongeler mes prélèvement trop vite, j'ai accidentellement coagulé le sang total.  [...] La coagulation étant due à l'albumine je suppose(70°C). Ma question est la suivante. Y'a-t-il un moyen de sauver mes prélèvements Y'at-til un traimtement que je peux leur faire subir pour pouvoir quand même en extraire de l'ADN ( le principal problème du sang coagulé c'est que ça bouche la colonne, ce qui rend la séparation du lysat par centrifugation impossible).  [...]

L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure

Bonsoir, je suis en master pro et je recherche le rôle de certain tampons présents lors de l'extraction d'ADN génomque et lors de la transformation de S.cerevisiae.  [...] Sinon dans un tampon général pour l'extraction d'ADN, j'ai du TritonX-100 je sais que dans certain cas d'immunocytochimie c'est pour éviter que les molécules d'eau s'adsorbent sur une surface en verre mais là.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN ( ADN simple brin)

je sollicite votre aide, je suis entrain de mettre en place une technique d'extraction qui au final me donne de l'ADN simple brin... j'aimerai faire une purification sur colonne de silice, malheureusement j'ai l'impression que mon ADN n'est pas élué il reste accroché à la silice, car après avoir fait plusieurs real time en comparant ma technique avec une technique classique sur colonne de type Qiagen, les Cp sont très différent j'obtiens un Cp de l'ordre de 13 pour Qiagen et d'environ 20 pour ma technique.  [...] je pense que j'ai pas donné assez d'informations, ma technique d'extraction est différente de celle de Qiagen ( protéinase K, sels chaotropique...), en tout point, sauf que j'utilise les différentes solutions ( AW1,AW2) de la compagnie Quiagen pour les différents lavages, et je dépose mon extrait( non purifié, extraction de type alcool et sels) sur une colonne de silice pour purifier, on utilise la solution de Qiagen le AE pour l'élution.  [...]

[Biologie Moléculaire] solution de liaison

mettre une solution de liaison, puis chauffer-. le gel se dissous. puis j'ajoute de la silice, puis après chauffage et centrifugation, on obtient le complexe adn/silice sous forme de précipité qu'on lave par après-. on obtient alors complexe adn/silice pur puis après élution on obtient précipité de silice qu'on jette + adn pur dans surnageant, voilou voilà, comme ça j'ai vraiment tout dis.  [...] en fait, je ne sais pas si c'est pour favoriser la liaison adn-silice ou pour faciliter la dissolution de l'agarose quand on chauffe.  [...]

[Génétique] kit qiagen

Ceci dit, à peu de choses près, on sait tous ce qu'il y a dans les solutions des kits surtout pour une technique aussi simple que l'extraction de plasmides. Dans les tampons de lyse tu as du SDS et de la soude (pH 12-13), dans la seconde solution de neutralisation tu as un agent acide, les solutions de lavages sont à bases d'alcool, le TE est du Tris-EDTA et la colonne contient une résile en silice.  [...] L'ADN interagissant avec la silice par des interactions polaires, un solvant polaire comme l'eau élue l'ADN (certain kit Qiagen utilise simplement de l'eau pour l'élution), pour les lavages, l'alcool permet ainsi le maintien de l'ADN sur la silice.  [...]

Besoin d'aide pour compréhension d'un article

Genomic DNA was extracted from clipped toes or blood using the SDS-proteinase K/PhenolChloroform extraction method. The primer combination L-Pro-ML (5'-GGCACCCAAGGCCAAAATTCT 3') and H-12S1-ML (5'-CAAGGCCAGGACCAAACCTTTA 3') was used for amplifying the D-loop and sequencing.  [...] Methode d'extraction au phenol-chlorophorme au SDS-protéinase K. On veut extraire l'ADN. On va mettre du phénol chloroforme dans notre echantillon pour précipiter les protéines. L'ADN reste en solution dans la phase aqueuse qui est récupérée par centrifugation.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]

[Biologie Moléculaire] Il y a quoi dans un kit d'extraction d'ADN?

Je dois taper mon rapport de stage et détailler deux types d'extraction d'ADN génomique de plante.  [...] Le deuxième procédé fonctionne avec des billes magnétiques qui retiennent l'ADN ce qui permet d'éliminer le milieu et de laver l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN par kit

J'ai fais beaucoup de recherches mais je n'arrive pas à trouver comment se fait l'interaction entre l'ADN ou l'ARN sur une membrane de silice dans les kits habituels de purification s'il vous plait si quelqu'un peut m'expliquer cette interaction et merci d'avance.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interaction silice/acide nucléique

J'ai fais beaucoup de recherches mais je n'arrive pas à trouver comment se fait l'interaction entre l'ADN ou l'ARN sur une membrane de silice dans les kits habituels de purification.  [...] Je pense à une interaction électrostatique entre les phosphate (charge -) des acides nucléiques et une charge + de la silice (laquelle).  [...]