• Santé - Extraction, ADN, Kit, Commercial

Kit extraction dna

Prière de m'éclaircir les étapes d'extraction d'adn génomique avec le kit commercial Purelink tm genomic DNA mini kit.  [...] Je fais souvent l'extraction avec la méthode classique phénol-chloroform et maintenant je veux utiliser ce kit pour l'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration dosage ARN

Si je lave ma cuve d'électrophorèse avec du SDS 10%, et que je rince à l'eau DEPC... que j'utilise que des erlens/éprouvette stérile, que je fait mon tampon de migration avec de l'eau DEPC. Croyez-vous que cela sera suffisant pour éviter les dégradations.   [...] Ca me parait juste énorme d'avoir de telles concentrations grâce à un kit commercial. J'avais des rendements dans ces eaux là mais par la bonne vieille méthode de l'extraction au phénol, mes rendements par kit étaient beaucoup moins importants.  [...]

[Biologie Moléculaire] [Manips Labo] Produire et purifier du ssDNA

2- une bonne technique de purification de ce ssDNA ( le seul essaie de kit s'est soldé par un echec) les Kit commerciaux affirment que le ssDNA se fixe sur les colonnes mais rien n'est connu quant à l'efficacité.  [...] remarque 2. une simple purif phénol chlo et précipitation ne marche pas Sinon pour le kit commercial, étais tu dans les quantités recommandées (i.e. si tu as trop peu de matériel, tu risques de perdre le matériel). As tu la possibilité de rajouter un ADN neutre pour tes manips ou du glycogène pour la précipitation à l'éthanol Tu veux purifier pour enlever quoi au fait Les primers, les enzymes, la matrice.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de clonage avec pT7Blue

Nous avons ouvert le plasmide= end conversion reaction puis incubation 22'C 15 min, inactivation de cette reaction a 75'C pendant 5 min. Refroidissement dans la galce 2 min puis centrifugation. A moins que le plasmide soit deja ouvert, c'etait un kit commercial.  [...] Si j'ai bien compris le TP (en anglais...) vuque le test positif n'a pas marché avec pT7Blue plasmide, on a donc utiliser pBluescript, mais je n'en suis pas sure... En cas de controle positif du kit commercial negatif, il faut donc changer le vecteur A quoi peut etre dut cet echec.  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

Je viens de terminer pour la 6ème fois mon extraction d'ARN totaux à partir de cerveaux de souris par la méthode du Trizol puis Chloroforme et j'ai toujours le même problème. Au final, j'ai une très faible concentration d'ARN (de l'ordre de 200ng/µL).  [...] Dans le labo où je suis, on utilise un kit commercial qui fonctionne pas trop mal. le kit absolutely RNA miniprep kit de Stratagene.  [...]

Béta mercapto

Comment utilise-t-on le Bêta mercapto dans une extraction d'ADN chez les végétaux Y'a t'il un volume exact à ajouter dans le tube, si oui à quel moment.  [...] Mon ADN est merdique à cause des protéines qui le saturent d'où mon envie d'utiliser le béta mercapto pour casser les ponts disulfures et espérer avoir un meilleur résultat. Comment et à quel moment reste mon mystère.  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

Enfin, dans le cadre de mes recherches, je vais commander un kit commercial, je vais donc essayer de voir ce qu'ils ont fait pour la conservation.  [...] Je viens bien avoir tes infos si tu arrives à les avoir concernant ton kit commercial. Mais à mon avis c'est pas gagné ^^ Secret professionnel oblige.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Ensuite, il faut refaire une pcr en utilisant le résultat des deux pcr précédentes comme template et les amorces non mutées qui encadrent donc la région mutée et qui comprennent les deux sites de restriction. alors la c'est definitif je suis dans le champs, je vais attendre que l'image soit validee pour voir si ca m'eclaire.   [...] J'ai lu que si je veux muter un codon, je dois faire des primers avec 21 nucleotides en amont er 21 en aval de mon codon mute pour etre sur que le primer puisse se fixer. Alors je ne comprends pas comment les segments qui contiennent le site de restriction peuvent se terminer par la codon mute vu que le codon est entre 21 nucleotides de part et d'autre.   [...]

[Biochimie] Conservation de ROS

Je cherche à quantifier un niveau relatif de production d'espèces réactive de l'oxygène pour un organisme. Pour cela je vais tester plusieurs méthodes et je voulais savoir si il existait un moyen de fixer ces réactifs oxygénés très instables ou si je devais absolument faire mes dosage dans la foulée.   [...] Okay c'est aussi simple que ça... Et, puis-je connaitre votre avis sur les méthodes de dosage... Je pense utiliser le nitro blue, et un kit amplex red. Puis, je ferais certainement un dosage de l'activité anti-ox à l'aide d'un kit commercial.  [...]

[Divers] utilisation de imageJ

je suis en train de mettre au point un protocole de migration,mais avant d'utiliser des kits commerciaux, j'aimerais pouvoir mesurer la migration observée (images prises sur vidéo-microscopie) en utilisant image J.le souci c'est que je ne connais pas du tout le logiciel.  [...] combien d'images dois-tu traiter, as-tu des connaissances en programmation (saurais-tu écrire un programme qui récupère un tableau de nombres et calcule la distance de migration à partir des coordonnées des points), as-tu des connaissances en java Pourrais-tu m'indiquer un lien ou pourrais-tu poster une image du même type que celles que tu veux analyser.   [...]