• Santé - Extraction, ADN, Cellules

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN de cellules eucaryotes, lyse

le phénol et le chlorophorme permettent de solubiliser d'une part les protéines et les lipides d'autre part, cela fait partie de l'extration à part entière ou bien ces produits interviennent-ils également dans la lyse des cellules.  [...] pour la suite du protocole d'extraction d'ADN, on utilise le phénol et le chlorophorme à partir de notre lysat cellulaire c'est bien ça ou bien doit-on préalablement centrifuger pour éliminer l'eau.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

Je dois trouver le rôle de chacun des composants d'un tampon de lyse précédant l'extraction d'ADN (extraction phénol - chlorophorme) à partir de cellules animales. Quelqu'un pourrait-il me confirmer ou infirmer les rôles supposés.  [...] Tris pH8 - ajustement du pH à 8,0 qui permet d'éviter de se retrouver avec un pH acide qui favorise la dégradation de l'ADN.  [...]

[Biochimie] TPE sur l'ADN

- l'extraction totale d'ADN. C'est celle que l'on effectue, par exemple, sur des prélèvements de sang ou des cellules de l'épithélium buccal).  [...] - le deuxième type d'extraction est l'extraction différentielle. il s'agit ici de séparer de l'ADN provenant de deux fractions différentes. Exemple le plus courant. mélange de cellules épithéliales (fraction féminine) et de spermatozoïdes (fraction masculine) que l'on peut retrouver sur des prélèvements de type préservatifs, écouvillons vaginaux.  [...]

[Divers] L'extraction d'ADN

- l'extraction différentielle. il s'agit ici de séparer de l'ADN provenant de deux fractions différentes. Exemple le plus courant. mélange de cellules épithéliales (fraction féminine) et de spermatozoïdes (fraction masculine) que l'on peut retrouver sur des prélèvements de type préservatifs, écouvillons vaginaux.  [...] Petite précision supplémentaire. les extractions réalisées à partir de traces ont toujours un plus faible rendement. En cause. la faible quantité d'ADN et une plus ou moins bonne qualité (dégradation, mélanges, inhibiteurs de PCR, etc).  [...]

[Biotechnologie] Souches d'expression et préparation de plasmides

2* L'extraction d'ADN plasmidique consiste à effectuer la lyse des cellules au moyen d'un détergent (dodécyl sulfate de sodium) en présence de soude, à pH 13. A ce pH très alcalin, l'ADN est dénaturé, c'est-à-dire que les deux brins de la double-hélice sont séparés.  [...] On neutralise ensuite rapidement la solution, ce qui provoque la rénaturation brutale (réappariement des brins du duplex d'ADN). L'ADN chromosomique, très long (~10v pb), ne parvient pas à se réapparier complètement et forme des enchevètrements insolubles.  [...]

La Pcr

extraction d'ADN ca veut dire isoler les molecules d'ADN, c'est a dire le materiel genetique, du reste des composants des cellules.  [...] Et PCR signifie Polymerase Chain Reaction, ou en francais reaction de polymerisation (sous entendu de l'ADN) en chaine. Cette technique permet d'amplifier l'ADN. En faisant court, l'enzyme ADN polymerase catalyse la reproduction a l'identique d'un brin d'ADN au cours d'un cycle de reaction (plusieurs etapes a differentes temperatures), et on fait plusieurs cycles de reaction a la suite (en chaine donc) pour obtenir apres n cycles 2[EXP]n[EXP] fois plus de molecules.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Je recueillais ensuite ces cellules pour amplifier les séquences Alu présentent et pour déterminer ensuite, par électrophorèse, la proportion d'individus présentant ou non la séquence Alu dans leur génome.  [...] Simplement pour vous expliquer le protocole. je devais d'Abord isoler l'ADN de quelques potes (et moins potes héhé) à partir de cellules buccales. J'utilisais ensuite du chelex pour absorber les produits de lyse cellulaire pouvant inerférer avec le processus d'amplification du PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification par PCR

Oui et non. Trop peut aussi favoriser la fixation des amorces sur des zones non spécifiques, pouvant expliquer cette bande de 100pb. Les amorces sont de toute façon toujours en excès (La réaction perd de son efficacité au fil des cycles, autant que ce ne soit pas pour un truc aussi bête que ça) mais il convient de tester différentes concentrations pour être sur de ne pas avoir ce type de problèmes.   [...] Tu peux aussi purifier la bande à partir du gel, il existe des kits le permettant. faut découper le gel à partir de la photo prise pour situer sa bande puis on élue l'ADN avec des colonnes comme pour une extraction d'ADN à partir de cellules.  [...]

extraction phénol chloroforme

L'extraction phenol/chloroforme (ou old school ) ne permet pas à elle seule de faire une extraction d'ADN. Il faut faire une lyse des cellules (lyse alcaline ou pk ou...) et d'autres étapes d'extraction/purification/précipitation/lavages peuvent être ajoutées.  [...] L'extraction phénol ne permet que de laver ton ADN préparé en le débarassant des protéines (jusqu'à un certain point)... reste plus qu'a faire une extraction chloroforme pour enlever le phenol qui est dissout dans la phase acqueuse.  [...]

[Biochimie] purification ADN thymus de veau

2. Rendu à une certaine étape dans le protocole, je dois briser les membranes plasmiques par bris mécanique ainsi qu'à l'aide d'une solution de tris-HCl, NaCl 0.075M et de EDTA qui je crois provoque la lyse des cellules en raison de sa concentration plus faible en sels que le milieu intracellulaire (en fait je ne suis pas certaine que la concentration intracellulaire soit plus grande que celle de la solution).  [...] Le thymus de veau est un abat - une pièce de boucherie courante. S'agissant en plus d'un organe lymphoïde, il est riche en lymphocytes - des cellules ayant le rapport volume du noyau (ADN) sur volume total des plus élevés. Ce qui permet de se fournir à moindre frais (+ dans un supermarché) du matériel biologique (riche en ADN) pour une première expérience d'extraction d'ADN à partir de tissu animal.  [...]