• Santé - Extinction, Protéine, Enzyme

[Biologie Cellulaire] Traduction d'une protéine avec codon stop prématuré

J'aimerai regarder par immuno l'extinction de cette protéine. Mon anticorps qui détecte l'enzyme non muté cible la zone Nterminale.  [...] TOn anticorps va détecter forcement la forme tronquée (sauf si elle est éliminée trop rapidement en effet). Mais ce que je n'arrive pas a comprends c'est comment tu peux espérer voir l'extinction de ta protéine par western.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cinétique et Quantification gène et protéine in vitro Systeme CRE/LOX

Je souhaite faire une cinétique représentant extinction du gène et de la protéine après ajout d'une enzyme CRE.  [...] Comment réaliser une cinétique d'extinction de transcription de ma protéine X en RT PCR J'ai du mal à comprendre comment faire.  [...]

[Biochimie] Pourquoi parle-t-on pour le cas des protéine du coefficient spécifique d'extinction.

au sujet de l'absorbance des proteine via la loi de beer lambert le coefficient utilisé pour les proteine est E 1% 1cm. Ce qu'on appelle le coefficient spécifique d'extinction. La concentration y est exprimée en g/ml.  [...] alors est ce juste une convention ou en fait il est absurde de parler de coefficient d'extinction molaire pour les protéine pcque elle possède un haut poid moleculaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Souris knock out et invalidation conditionnelle Cre/Loxp

Il existe aussi des protéines de fusion entre Cre et le domaine de liaison du ligand d'un récepteur aux oestrogènes. Cette protéine n'est capable de transloquer dans le noyau et de reconnaitre les LoxP qu'en présence d'un agoniste du récepteur aux oestrogènes.  [...] C'est pourquoi je veux mesurer son extinction dans le temps, pour savoir à partir de combien de temps je peux faire mes analyses in vitro sur le rôle de ce gène. je m'attends à une diminution de l'expression de la protéine et du messager du coup. et j'aimerai mettre en évidence cette diminution.  [...]

[Biochimie] Protéine et Absorbance

A = E * l * c où A est l'absorbance, E le coefficient d'extinction de la protéine, l est la largeur de l'écahntillion et c la concentration de ta protéine.  [...] En effet, le BSA ou la gamma-globuline sont en général des standards utilisés pour des Bradford. On en connait la concentration et on peut donc calculer la fameuse constante, puis utiliser celle-ci pour estimer la concentration d'une autre protéine qui soit suffisamment semblable à ces standards(vu que le coefficient d'extinction dépend de la protéine).  [...]

[Biochimie] si RNA

Le processus de dégradation des ARNm prend un certain temps, mais ce qui va déterminer réellement le temps au bout duquel l'extinction de la protéine sera la plus forte, c'est la demi-vie de la protéine. En effet, les protéines traduites juste avant la dégradation de l'ARNm ont une durée de vie plus ou moins longue qui déterminera le moment où l'on verra une bonne diminution de leur quantité.  [...] Généralement on regarde l'extinction d'une protéine à partir de 48 heures après transfection, mais on peut la regarder 96 heures après ou plus dans certains cas si la protéine est très stable et a une demi-vie longue.  [...]

[Biochimie] Rendement d'une purification

Mon problème c'est que le sérum de base semble avoir une activité enzymatique moins importante que la fraction obtenue après dessalage (86 UI/l contre 143 UI/l).  [...] Maintenant a tu calculé l'activité de ton enzyme à l'aide d'un etalon ou à l'aide du coefficient d'extinction moleculaire (peut être une erreur de calcul).  [...]

[Biochimie] Absorbance de TGO

Je cherche à connaitre la valeur de l'absorbance de l'enzyme TGO (transaminase glutamique oxalo-acétique).  [...] On ne peut pas te donner la valeur d'absorbance de ta protéine car ce n'est pas une valeur fixe. Elle dépend de la concentration de ta protéine. Mais si tu connais la concentration de ta prot et son coefficient d'extinction molaire, tu peux calculer l'absorbance avec la loi de Beer-Lambert.  [...]

[Biologie Cellulaire] Lipofectamine 2000 et antibiotiques ?

Pour les concentrations en siRNA, généralement 50 nM est la concentration qui marche pour tous les siRNA que j'ai pu tester (environ 3 gènes différents en tout sur 3 lignées cellulaires différentes, donc pas énorme...). Cela peut te permettre dans un premier temps de définir à quel temps tu as la meilleure extinction (entre 24 et 72 heures en ARNm, entre 48 et 96 heures en protéines).  [...] .. A partir de là, tu peux vraiment commencer les manips publiables (toutefois ne pas négliger les westerns montrant l'extinction de la protéine par le siRNA car ils sont demandés par les revues).  [...]

[Biochimie] Travaux pratiques de biochimie des systemes integrés urgents

Décrit nous le matériel à ta disposition, une fois fait il existe de nombreuses expériences... notamment un marquage de protéine par anticorps marqués qui sont suivit au court du temps par microscopie optique (ça permet de montrer la dynamique membranaire avec des méthodes d'extinction ou autres.).  [...] En général juste pour la fluorescence tu transfecte la cellule avec un plasmide contenant la protéine d'interet suivie de la GFP (ou EGFP pour les eucaryotes je pense) Il s'agit d'une construction à faire à l'aide par exemple d'un plasmide EGFP dans lequel tu insères ta séquence d'interet (mais les manips sont longues, il faut compter un mois au moins).  [...]