• Santé - Expression, Protéine, Site

[Biologie Moléculaire] activité des protéines recombinantes

Je me demande si les protéines recombinantes fusionnées à la GST peuvent être active dans les cellules. D'autre part, est-ce qu'il est possible de couper la fusion GST de ces protéines.  [...] 2) Oui, il suffit d'insérer un site de clivage entre la GST et la protéine d'intérêt. Il existe des vecteurs contenant déjà ce site de clivage en amont du MCS, par exemple le Pgex6P1 pour l'expression en bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de glycosylation

Le site de glycosylation de ma protéine n'a pas d'effet sur son activité biologique donc je peux tenter le système d'expression bactérien.  [...] Une glycoprotéine, ça s'exprime en général très mal en bactérie. Les N-glycosylations jouent un role central dans le repliement des glycoprotéines et leur suppression se traduit souvent par l'aggrégation massive de la protéine. Tu la verras sur un gel mais elle sera probablement incapable de quoi que ce soit.  [...]

[Génétique] Ouvrage général de génétique

Je suis en train de rédiger mon manuscrit et même si j'ai une vague idée (suffisante pour un physicien) de l'intéret biologique, je souhaiterai aller plus loin pour dire le moins de betises possible évidemment et surtout ne pas me tromper dans la portée biologique de ce que je fais.   [...] Auriez vous un ouvrage à me proposer qui couvre disons de la recherche d'un site d'activation sur l'adn par un ou plusieurs facteurs de transcriptions à la l'expression du gène associé par la fabrication d'une protéine à l'exterieur du noyau.  [...]

Dépression : vers un traitement par thérapie génique ?

Les chercheurs ont alors eu l'idée de déterminer précisément le site d'action de la protéine p11 dans les symptômes dépressifs. En procédant à l' extinction spécifique du gène dans deux régions cérébrales par ARN interférence, ils ont constaté que seule l'extinction de l'expression de la protéine p11 spécifiquement dans le noyau accumbens entraîne un état dépressif de l'animal.  [...] Ces résultats pourraient s'avérer identiques chez l'homme. En effet, les chercheurs ont complété leurs recherches en autopsiant les cerveaux d'hommes souffrant de dépression et ont montré que la protéine p11 est significativement moins exprimée dans les noyaux accumbens des personnes dépressives.  [...]

[Biologie Cellulaire] groupe sanguin

Lorsque on s'intéresse à l'antigène D, on dit qu'un individu est RhD positif s'il possède un gène D fonctionnel. Au contraire, on est RhD négatif si le gène est délété, ou a subi des mutations empêchant l'expression de la protéine (à tout hasard, dans le promoteur, au niveau d'un site d'épissage, enfin tout ce que tu veux.  [...] Ce n'est pas la même chose pour les systèmes (C,c) et (E,e). En effet, le gène codant la protéine correspondante (un canal transmembranaire) est dans tout les cas fonctionnel. Ce qui change, c'est une mutation faux sens au niveau d'un codon qui détermine un acide aminé extra-cellulaire.  [...]

Expression de gènes

Mais ce n'est pas parcque l'on connait le code génétique que l'on arrive à le comprendre. Identifier un gène et son promoteur au niveau informatique signifie qu'ensuite, il faut vérifier son expression (et comme vous le dites, ce gène peut n'être exprimé que dans certains tissus ou stade de développement, par exemple).  [...] Ce site regroupe les informations de tout un tas d'autres databases, et permet de visualiser fonctions, localisations intrqcellulqire, domaines de la protéine, les différents transcripts, son expression dans différents types cellulaires et présente bien sur toutes les sources.  [...]

[Biochimie] Petite question sur le Western Blot

Le probleme est que le raisonement repose sur une enorme approximation de départ (que la protéine surexprimée va avoir un impacte significatif sur la quantité de protéines). Or ce n'est jamais le cas, les variations d'expression d'une proteine ne seront jamais suffisantes pour avoir un impacte sur la quantification.  [...] Dans ton exemple tu sous entends en fait que la protéine B dont l'expression a été boosté représente la majorité de la quantité de protéine que tu déposes sur ton gel ce qui me parait un peu abusif. J'ai tendance à penser que même si cette expression augmente, elle reste marginale devant la quantité de protéine totale et donc la quantité de protéine totale n'est pas affecté par l'augmentation de protéine B car sa valeur est tout à fait négligeable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression hétérologue de protéine : vecteur baculoviral

.. J'ai décidé de rester chez coli parce que les essais préliminaires d'expression de cette protéine mais avec un tag MBP (j'utilise hexa-His) ont été concluants.  [...] Je fais déjà une production cytoplasmique chez coli. Si je mets du KI c'est justement pour éviter au maximum les corps d'inclusion. Outre la structure, il me faut la protéine en forme pour les études fonctionnelles Donc, si je dois choisir entre jongler avec un tas de solutions chimiques qui l'agressent et jongler en bio mol pour la faire produire dans des cellules plus adaptées, je préfère la seconde solution.  [...]

[Immunologie] expression et phosphorylation de la protéine

Je souhaite avoir une explication pour le faite d'avoir un marquage de ma protéine sous sa forme phosphorylée en immunohistochimie alors qu'au niveau de son expression protéique le marquage est négatif sur la même tumeur. J'explique ça par le spécificité de l'anticorps mais est ce qu'il y d'autres explications.  [...] Les conditions d'hybridation. en WB la protéine est dénaturée, pas forcément en IHC. Certains anticorps ne fonctionnent qu'en IHC.  [...]

Expression de protéines

J'ai fait une expression de protéine taguée Histidine contenue dans un vecteur d'expression pTrcHis2B (protéine de Plasmodium falciparum ) dans des bactéries d'expression Rosetta 2, seulement lors de l'extraction de cette protéine puis dépôt sur gel j'ai 2 tailles différentes de cette même protéine.  [...] Si tu es certain que les deux bandes correspondent à ta protéine (la mass spec est de loin la méthode la plus fiable, bien plus qu'un WB), tu as probablement eu une protéolyse spontanée. Il faudrait savoir si ta bande de plus haut poids correspond à la masse attendue pour ta protéine, auquel cas tu aurais de la protéine intacte en fraction soluble et de la protéine clivée en fraction insoluble.  [...]