• Santé - Expression, Protéine, Fusion

[Biologie Moléculaire] Gènes homéotiques - Page 2

Cette partie de la proteine est une proteine fusion avec Gal4 qui lie un certain nombre de promoteur de gene. En ce faisant, les genes sont deplaces de leur zone d'expression vers la peripherie et sont reprimes. Je ne suis plus sur, mais ce deplacement provoque aussi l'expression d'autre gene qui ne le sont pas normalement (par contrainte physique).  [...] Mais de toute façon, si cette protéine intervient dans le remodelage de la chromatine, elle intervient dans la répression de gènes (silencing ).  [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

salut,je suis désolée mais quelqu'un peut m'expliquer tout ça.je ne connait pas un gene qui s'appelle lacZ',et je demonde pourquoi on doit utuliser IPTG pour provoquer_ meme experimentalement- l'expression du gene lacZ qui vas donner une protéine inactif qui sera besoin d'un complimentair.  [...] L'IPTG est utilisée notement en biotechnologie dans les cas de productions de protéines recombinantes par un vecteur d'expression que l'on fabriquera avec un gène d'une protéine fusion (le gène lacZ ds ce cas ci) qui permettra une lecture du gène controlée et donc une production controlée de la protéine cible.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

- Pour faire une protéine de fusion, est ce qu'il faut mettre le gène codant pour la protéine d'intérêt et celui pour le gène que l'on souhaite fusionner avec celle-ci (par exemple la poly histidine) sur le même plasmide sans les séparer d'un promoteur ou est ce qu'il faut rajouter quelque chose en plus.  [...] C'est un vecteur d'expression pour la proinsuline et l'écotine. Et dans l'énoncé, il est noté que l'écotine est une protéine dimérique. Du coup, je pensais qu'il fallait faire deux plasmides. Un avec la proinsuline et l'écotine et un autre juste avec l'écotine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Est-il possible que la protéine de fusion soit utilisée dans l'objectif de découvrir les fonctions de la forme soluble d'une protéine transmembranaire déja connue La protéine de fusion pourrait-elle mimer les fonctions de la protéine soluble initiale.  [...] En fait on utilise ces protéines de fusion pour faciliter la purification de la protéine et son couplage ultérieur à autre chose pour de la vectorisation. En général c'est juste le domaine Fc qui est pris dans la protéine de fusion, si tu veux en savoir plus envoie moi un MP.  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

J'utilise une protéine transgénique qui est en fusion avec le marqueur GFP. Grâce à la fluorescence il m'est possible de suivre l'expression de ma protéine dans le sang des animaux. Mais voilà que la fluorescence a subitement disparue de tous les animaux, alors que la protéine transgénique continue de s'exprimer.  [...] C'est un peu délicat, car on ne dispose pas d'anticorps contre cette protéine dans la communauté. Aussi on utilise un anti-GFP. Le hic c'est qu'en western je vois ma protéine de fusion au poids attendu (poids de la protéine + poids du GFP), mais chez ces souris la fluorescence sanguine était encore présente, donc il n'y a pas de soucis pour elles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs intégratif+inductible

Ce que je ne comprends pas non plus, c'est que si c'est un vecteur inductible, normalement, il ne devrait pas y avoir d'expression en absence d'induction, et donc aucune raison qu'il y ait une sélection négative des transformants exprimant trop fortement, car la sélection se fait en absence d'induction.  [...] Ce raisonnement n'est pas valable si la GFP n'est pas en fusion avec votre protéine, et que la GFP vous sert de controle de transfection. Dans ce cas ce serait une toxicité due à la GFP, ce qui est connue, mais pourquoi n'est elle pas présente en transitoire Dans ce cas, qu'en est il de l'expression de la GFP dans vos stables.  [...]

Probleme d'induction de GST dans bacterie

Comme écrit dans mon titre on essaye d'induire l'expression de la GST et d'une protéine fusionné avec la GST dans des BL-21 avec de l'IPTG. Le vecteur est PGEX-4T3.  [...] 5. Ca marche, c'est le plus important. Tu peux éventuellement utiliser d'autres souches d'expression pour améliorer les choses mais la différence sera probablement assez faible. Si tu vois une dégradation importante (de nombreuses bandes de masses plus faibles que ta protéine de fusion, tu peux forcer la dose sur les inhibiteurs de protéase lors de la lyse des bactéries.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

J'ai besoin d'aide pour une question dans un exercice portant sur la construction d'un vecteur d'expression pour une proteine recombinante.  [...] Pour produire cette proteine de fusion dans les cellules de souris, il faut donc assembler un ADN recombinant puis de l'insérer dans un plasmide (ou vecteur ) d'expression permettant la transcription puis la traduction dans les cellules. Au préalable, afin de disposer de suffisamment de vecteur pour les cellules de souris, il est necessaire d'amplifier le vecteur dans le collibacille.  [...]

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

Ils disent ensuite que le produit de PCR () est purifié par électrophorèse sur gel d'agarose et ensuite il est encore inséré dans un autre vecteur entry vector en utilisant une deuxième PCR(). Puis ils utilisent enfin un vecteur d'expression pour obtenir la protéine de fusion GST-gene d'intérêt.  [...] C'est assez simple en fait. Le gene d'interet etait deja present sur un plasmide mais qui ne leur convenait pas. Ils ont donc amplifié le gene par PCR, on purifier le produit d'amplification sur gel pour se debarasser du plasmid ayant servi de matrice, pour cloner le tout dans un plasmide permettant l'expression de la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

voila j'ai transfecté mes cellules (HepaRG) avec un plasmide pcDNA3.1 Directional TOPO (Invitrogen) contenant mon insert d'intérêt (la protéase NS3 du virus de l'hépatite C). Ce plasmide contient aussi une tag V5, qui me permet (normalement ^^) de detecter ma protéine une fois exprimée dans mes cellules (grace à un anticorps anti-V5, Invitrogen).  [...] J'ai une question un peu bête mais as-tu vérifié que ta protéine de fusion NS3-V5 est bien exprimée dans tes cellules après transfection avec un simple SDS-PAGE Je n'ai jamais fait d'expression en cellules eucaryotes mais je suppose que c'est un peu comme pour les bactéries.  [...]