• Santé - Expression, Bactéries, Plasmide

[Microbiologie] Agitation, repiquage

Aussi, lorsque l'on veut détecter des bactéries ayant été transformées (ayant capturé un plasmide contenant un gène de résistance à l'ampicilline) sur un milieu sélectif contenant donc de l'ampicilline et qu'on repique ensuite les colonies qui se sont développées, il vaut mieux repiquer des colonies de taille intermédiaire et pas des colonies trop volumineuses. Pourquoi Un lien avec les mutations.  [...] Les bactéries modifient leur métabolisme lorsqu'elles prennent la forme d'un biofilm. Aussi l'expression du plasmide peut s'en trouver modifier.  [...]

Faire suivre une promoteur eucaryote et procaryote

En étudiant la structure d'un plasmide servant a faire de la transgénèse via agrobacterium, j'ai rencontré un soucis avec la structure du gène de résistance. Le gène utilisé est le gène de résistance a la kanamycine, NPTII (pour néomycine phosphotransférase II).  [...] Dans la construction du plasmide il est précédé du promoteur du CaMV 35S. Cependant pour réaliser la selection des bactéries transformé puis des cellules végétales transformé, on a besoin de l'expression de NPTII à la fois dans les bactéries et les cellules eucaryotes.  [...]

[Microbiologie] transformation bactérienne

On transforme avec un plasmide qui contient en général plusieurs gènes. Un gène de résistance pour sélectionner les bactéries transformantes, et un gène d'intérêt (pour l'expression d'une protéine par exemple).  [...] Rien ne nous empêche de transformer une cellule bactérienne avec plusieurs vecteurs, ou d'insérer sur un même vecteur plusieurs gènes d'intérêt. Mais votre question nécessite quelques précisions.  [...]

Criblage

Dans la synthèse de l'insuline in vitro par exemple, on effectue un criblage des colonies blanches obtenues après ensemencement sur un milieu contenant le lactose. On rechercher les bactéries ayant un plasmide contenant le gène recherché mais le fait que ces colonies soient blanches, cela veut dire pas d'expression du gène de la beta-galactosidase et donc insertion du gène d'intérêt non.  [...] Si une colonie pousse, c'est qu'elle a bien reçu un plasmide. cet événement est séléctionné par un gène de résistance à un antibiotique présent dans le milieu.  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

je dois cultiver des bactéries possédant un plasmide de résistance à un antibiotique. Dans le bouillon, je dois mettre cet antibiotique. Je ne comprends pas pourquoi puisque les bactéries sont résistantes Pouvez m'éclairer.  [...] - Au cours des divisions cellulaires, le plasmide peut ne pas être transmis à certaines bactéries filles, il y aura donc apparition de bactéries non résistantes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fournisseur plasmide d'expression (avec ORF spécifique)

Je recherche une boite qui pourrait me fournir (rapidement) un plasmide d'expression avec l'ORF de mon choix (de la même manière que l'on choisi des siRNA dans une banque).  [...] La question que l'on pose à l'aide de ce plasmide est urgente donc j'aimerai trouver le plus vite possible un plasmide d'expression AVEC PROMOTEUR et l'ORF d'intérêt. J'ai regardé chez Dharmacon, Invitrogen, Qiagen, Eurogentec et je n'ai rien trouvé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression d'un gène d'enzyme !

un viel homme a isolé une petite quantité d'attractase,une enzyme produisant une phéromone humaine puissante,à partir d'echantillon de cheveux de célébrités hollywoodiennes.Pour produire de l'attractase à son usage personnel,il a obtenu un clone génomique complet du gène de l'attractase,l'a connecté à un promoteur bactérien puissant dans un plasmide d'expression et a introduit le plasmide dans des cellules d'E coli.  [...] il a été anéanti de découvrir qu'aucune attractase n'etait produite par les cellules.Quelle est 'explication de son echec.   [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

Le plasmide se trouve dans la bactérie et vit sa vie indépendamment de son hôte. En clair, il se réplique à son rythme. Le nombre de copies présentes dans la bactérie est variable selon les plasmides. Il existe des plasmides qui se répliquent beaucoup (des dizaines de copies par bactéries) et à l'opposé des plasmides qui se répliquent peu (une à quelques unités par bactéries).  [...] En laboratoire, on utilise le plus souvent des plasmides high copy. Du coup, comme il y a beaucoup de plasmides par bactéries, toutes les descendantes ont le plasmide.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

ce peut il alors qu'en changeant de plasmide le résultat change et par conséquent si l'on effectue la transfection sur des bactéries des plasmides différents ayant tous les meme gene d'interret ( dans des expériences séparées sur la meme souche de bactérie) des résultats différents.  [...] Si la concentration de plasmide est trop élevée, on observe de la toxicité pour les bactéries. Cela dépend de la taille des plasmides.  [...]

plasmide

La fonction du plasmide est la même que celle du chromosome. porter des gènes, qui auront un effet sur la cellule lors de leur expression. Chez les bactéries, il porte souvent des gènes s'exprimant dans des cas particuliers (résistance aux antibiotiques par exemple).  [...] je rajouterais avec vigueur que les plasmides ne sont pas limités aux bactéries... c'est un outil naturellement présent chez la levure, par exemple (simple copie, multi-copie etc) et qu'il peut être intégré dans des cellules de mammifères en culture in vitro.  [...]