• Santé - étiquette, Protéine, Intérêt, Site

[Biologie Moléculaire] Vecteur pET15b

Il me semble qu'il fait office de site de clivage permettant de retirer le HisTag de la protéine (on a pas la thrombine entière dans le plasmide. juste quelques nucléotides).  [...] Pour préciser, dans la protéine exprimée, entre l'étiquette et ta protéine d'intérêt se trouve un site de clivage par la thrombine, qui est une protéase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunoprécipitation

En gros, j'arrive a sortir une petite bande sur mon western-blot mais ça représente un fifrelin. J'ai essayé divers tampons de lyse mais j'évite tout de même avec détergent ionique car le but final est de mettre en évidence des partenaires de cette protéine.  [...] La protéine d'intérêt est-elle taggée L'anticorps utilisé pour l'IP est -il dirigé contre une étiquette Avez-vous essayé un WB sur le culot de billes après IP en procédant à une étape de dénaturation pour être sûr de dissocier la protéine des billes (parfois des anticorps se lie très fortement, dans ce cas il faut peut-être changer d'anticorps pour rester dans des conditions natives, ou alors tester avec des concentrations salines plus importantes).  [...]

dégradation de protéine recombinante

Je rencontre actuellement un problème lors de l'expression et la purif d'une prot recombinante. j'utilise le vecteur d'esxpression pQE30 et je purifie sur colonne NI-NTA, mais voila lorsque que je charge le produit de ma purif sur gel SDS j'observe bien la protéine d'intérêt à la MM attendue mais également des bandes de MM plus basse.  [...] La seule chose que je peux dire c'est que lorsque je fais un immunoblot avec un anticorps anti-histidine je n'observe que ma protéine d'intérêt mais cela n'exclue pas que la protéine ait perdu son étiquette histidine lors de sa dégradation et que les bandes observées par coloration au nitrate d'argent ne soient pas ds formes de dégradation.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

Je ne suis pas du tout experte en purification de protéines mais en lisant les différentes étapes de la manip je me dis qu'en insérant la séquence codante pour la ligase dans E. coli, ils ont peut être en même temps créé une protéine de fusion avec une étiquette (par exemple GST ou Tag) et ont pu ensuite purifier cette protéine de fusion sur une colonne d'affinité.  [...] Cependant, d'après ce que vous me dites, j'isole la protéine grâce à l'étiquette sur colonne d'affinité. Donc je n'aurai sur mon gel, que les pistes 1 2 et 3 soit une seule piste de purification. Or, sur le gel dans la piste 3 et 4 il y a deux résultats de purification.  [...]

taille des tags

y a-t-il qq'un qui connait un site qui donne les tailles de tous les tags qu'on peut fusionner aux protéines Je cherche en particulier la taille de l'étiquette c-myc.  [...] 26 kDa pour la GST, le tag 6his fait donc 6 acides aminés. les autres, je ne sais pas.   [...]

Les récepteurs couplés aux protéines G | Dossier

Approche à partir de la queue cytoplasmique du récepteur. Cette approche est basée sur l'interaction de protéines issues de lysats de cerveaux de souris avec la queue cytoplasmique des MTR immobilisée sur une matrice. Une étiquette poly-histidine placée à l'extrémité N-terminale du peptide permet son immobilisation sur des billes recouvertes de nickel.  [...] Approche à partir du récepteur entier (TAP). La technique de purification par TAP repose sur la fusion du récepteur entier avec une étiquette portant deux modules d'affinité séparés par un site de clivage par une protéase spécifique. Cette méthode permet d'effectuer une purification de complexes protéiques en condition native.  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

Ceci est le minimum si on veut une protéine. Cependant, souvent, on aime bien ajouter une étiquette qui va faciliter la purification de la protéine (GST, FLAG, [HIS] 6, HA, etc...).  [...] Etiquettes, ce sont souvent des bouts de protéine qui fluoresce, on fait en sorte que notre ADN sera introduit juste après l'ADN correspondant à ces protéines, ainsi les deux protéines seront créées ensemble, et on sera sur que la construction fonctionne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Insertion d'un gène dans un vecteur...

Bonjour, je dois insérer un gène dans un vecteur pET 44(+) pour le cloner dans un E.Coli. Il doit aussi incorporer une étiquette 6-histidine en C-terminus de la séquence, et aucune autre étiquette. Je ne sais pas comment faire, j'ai trouvé la séquence de mon gène à insérer, mais je ne sais pas comment choisir la bonne enzyme et le bon site d'insertion...help.  [...] c'était pour un exercise, je l'ai remis ce matin. J'ai été voir le prof qui m'a expliqué. Merci quand même.   [...]

Traduction de termes anglais issus d'un article.

FLAG c'est une étiquette protéique qu'on ajoute aux protéines (protéine de fusion) justement pour faciliter sa détection, ou sa précipitation (avec un anticorps anti flag).  [...] si c'est ca. En fait il existe des vecteurs ou le tag (flag, 6his, myc, ou autre) est déjà là, en amont ou aval du site de clonage, du coup en intégrant ton cDNA en phase dans ce vecteur tu peux directement produire une protéine de fusion. Pratique.  [...]

Purification et extraction des protéines....

On nous fournit a la base du travail des Cellules d'E. Coli Contenant la protéine DsbA3 avec une séquence contenant une étiquette poly histidine.  [...] je pensais donc faire au prealable un choc osmotique pour recuperer la protéine et ensuite faire un Western Blot, c'est la ou commence mes problèmes car je n'arrive pas a trouver un protocole plutot simple de WB, donc si quelqu'un peut m'aider ca serait gentil.  [...]