• Santé - éthanol, Tampon, Membrane

[Biochimie] bruit de fond western blot

Je sais que nous on réutilise le méthanol dans lequel on a trempé la membrane car apparemment on a pas le choix d'utiliser du méthanol par contre pour le tampon de transfert, on peut utiliser de l'éthanol à la place du méthanol.  [...] Je confirme, méthanol pour mouiller la membrane c'est mieux, il suffit de tremper dans quelques ml sous la sorbonne, 30 sec juste histoire de mouiller la membrane, rien de si contraignant... Ensuite on peut la mettre à équilibrer dans le tampon de transfert pour lequel on utilise de l'éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot /tampon de transfert

De plus le methanol peut etre facilement remplace par de l'ethanol voire supprime (sauf utilisation de membrane PVDF evidemment).  [...] Rapidement...pareil, pas d'ajustement de pH et remplacement du methanol par de l'ethanol. Le retrait de l'ethanol peut ameliorer le rendement de transfert de proteines de haut poids moleculaire. On peut supprimer l'ethanol avec les membranes de PVDF, pas conseille avec les membranes de nitrocellulose.  [...]

[Biologie Cellulaire] membrane PVDF et methanol

Ma question se situe surtout au niveau du tampon, est-ce qu'il doit contenir 20% de méthanol comme pour les membranes nitrocelluloses ou pas du tout de méthanol. j'ai lu des choses différentes et je ne sais pas trop quoi en penser.  [...] au niveau du tampon, il faut bien utiliser 20% d'éthanol, car j'ai lu des articles où ils ne mettaient pas d'éthanol dans le tampon sur une membrane PVDF. alors je me pose des questions.  [...]

[Divers] Contenu "Matériels et méthodes" - rapport stage M1

Les extraits protéiques sont dénaturés à 95°C pendant 5 minutes en présence de LSB 1X final avant d'être déposés sur un gel de polyacrylamide dénaturant à 6%. Les immunoprécipitations sont dénaturées à 95°C pendant 5 minutes dans 25 µl de LSB 2,5X. Après migration électrophorétique, les protéines sont transférées en milieu liquide sur une membrane de nitrocellulose (HybondTM C Extra, Amersham Bioscience) pendant 1h30 dans un tampon de transfert (50 mM Tris base, 40 mM Glycine, 1,3 mM SDS et 10% éthanol).  [...] Après transfert, la membrane est bloquée dans une solution de lait 5% TBS-Tween 0,2% pendant 1 heure à température ambiante sous agitation. Elle est ensuite incubée avec les anticorps primaires anti-BRCA1 monoclonal (D9) dilué au 1/500 (Sigma®), anti-HSP60 monoclonal (CK) au 1/1000 (Sigma®) pendant une nuit à 4°C sur une plaque rotative.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

protéase / éthanol/ tampon de lyse / tampon de lavage tampon d'elution.  [...] Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

normalement, avant d'éluer (EB ou H2O) la colonne est centrifugée pour faire passer le tampon de lavage puis recentrifugée a vide. Normalement plus un poil d'ethanol.  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]

préparation de l'invertase

j aimerai bien savoir le rôle de chacun du tampon de citrate et le mélange toluène/éthanol dans la préparation de l'invertase à partir la levure de boulangerie.  [...] Il faudrait peut être savoir à quel moment interviennent le tampon et le mélange toluène/éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme purification sur gel d'agarose

tu as l'air de tout faire correctement... mon conseil serait d'ouvrir un kit nuef et de preparer toi meme le PE. et de prendre de nouvelles colones, il m'est arrivé des trucs bizarres avec certaines. Quand tu rajoutes ton tampon d'élution, il s'absorbe correctement sur la membrane.  [...] Par contre, la vitesse de centrifugation ne change rien du tout sur le rendement, et la deuxième étape de 1minute après PE ne sert que pour éviter d'avoir des traces d'éthanol dans l'éluat.  [...]

[Biologie Moléculaire] Kit Miniprep NucleoSpin Plasmid

Je crois pas qu'on puisse trouver la compo des buffers de MN ( vu qu'ils les vendent séparément pour une petite fortune..) mais par contre on peut connaitre ceux d'un kit similaire Qiagen. http.//www.qiagen.com/products/catal...-kit#resources.   [...] Super je vais regarder ça, mais je voudrait pas connaitre exactement la composition, juste savoir quel type de solution c'est, pour savoir comment elle agit sur la colonne, par exemple le tampon d'élution, par quel moyen décroche-t-il l'ADN de la colonne, etc.  [...]

[Biochimie] Transfert western blot raté

Le problème est que je souhaite confirmer que la bande présente sur mon gel est bien celle de ma protéine, donc je réalise un WB afin de localiser spécifiquement ma protéine d'intérêt. J'ai un gros soucis lors du transfert de ma protéine du gel vers la membrane PVDF.  [...] Apres activation, tu as mis équilibrer ta membrane dans le tampon de transfert (Les tampons de transfert doivent être à 4°C).  [...]