• Santé - éthanol, Protéines, Phase, Supérieur

[Biologie Cellulaire] protéines dans la phase organique?

J'aurai voulu savoir si quelqu'un aurait pu m'eclairer sur le fait que les proteines lors d'une extraction au phenol chloroforme migrent dans la phase organique alors qu'elles sont le plus souvent cytosolubles... Ne devraient elles pas se retrouver dans la phase acqueuse.  [...] Moi j'ai fait une extraction éthanol/chloroforme sur un broya de foie et les protéines étaient bien dans la phase supérieur aqueuse.  [...]

Expériences en génétique…

Euh en general pour intégrer l'adn à une bacterie, on passe plutot par un virus ( le lambda est bien) dans le quel se trouve en plus les genes de toutes les proteines necessaires à l'integration de l'adn au genome. (pour la technique c'est un peu complexe.  [...] Pour ce qui est du P32, on peux l'utiliser in vivo pour visualiser (par exemple) des protéines ou des acides nucléiques dans la cellule. Ce dont tu parles c'est de l'hybridation in situ et ça ne s'utilise pas avec un gel mais sur une cellule vivante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Après avoir récupéré la phase rouge contenant l'ADN et les protéines, on a ajouté 300µl d'éthanol 100% pour précipiter l'ADN. Après incubation 3mn, on centrifuge à 4600 tours pendant 5 mn. On prélève la phase aqueuse à laquelle on ajoute 1ml d'isopropanol pour précipiter les protéines.  [...] Un autre problème peut être que le SDS induit quelques soucis dans les dosages de protéines par la méthode Lowry. Dans certains kits tu as un produit supplémentaire à inclure dans ta réaction si tes échantillons contiennent du SDS, je saurais pas t'en dire plus vu que j'ai toujours utilisé ce genre de kit en suivant bêtement le protocole fourni.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

Tu peux essayer de refaire un Trizol par dessus pour te débarrasser des protéines... Tu vas re-perdre un peu d'ARN forcément, mais niveau pureté on devrait se retrouver vers quelque chose d'un peu plus optimal déjà.  [...] sinon faire un mélange avec methanol-chloroforme (récupérer la phase supérieur) suivi d'un mélange chloroforme (récuperer la phase supérieur) suivi d'une précipitation à l'acetate de sodium et ethanol (0.3M finaux d'acetate de Na, avec 2.5V de ethanol 99%, une heure a -20°, centrifuger récupérer le culot et le laver avec 250 microlitres ethanol 70%, centrifuger evacuer l'ethanol et resuspendre en eau-DEPC ) permet normalement d'avoir une bonne qualité d'ARN sans trop de pertes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fabrication Solution CTAB

Je lyse dans le CTAB (après avoir broyé à l'azote liquide)en incubant à 50°C pendant 10min puis 1h à 4°C. Ensuite j'ajoute du phénol.chloroforme et j'obtiens 3 phases. Je garde la phase supérieure où sont les acides nucléiques. Je précipite ensuite à l'éthanol absolu, et à froid.  [...] Il faut surtout bien agiter dans le phénol sinon ton adn ne passe pas en phase. Tu peux faire un contrôle en essayant de précipiter l'ADN directement après la lyse dans le CTAB (apres clarification éventuellement) en ajoutant un volume d'isopropanol et en agitant bien.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effet d'un Solvant Organique sur la Membrane Plasmique

L'autre fois, il explique que l'éthanol (Solvant Organique n'est ce pas) solubilise lipides + protéines membranaires.  [...] ca dépend du solvant je dirais. L'éthanol ne doit pas être un bon solvant des protéines.  [...]

TPE - question sur la dénaturation des protéines par l'éthanol

La protéine expose ses acides aminés hydrophiles à l'extérieur et ses acides aminés hydrophobes à l'intérieur. Ensuite, nous avons trouvé que l'éthanol est polaire (comme l'eau) et que la protéine perd sa structure tridimensionnelle en contact avec l'éthanol.  [...] Nous avons des problèmes à partir d'ici. en présence d'éthanol (polaire), la protéine expose ses acides aminés apolaires à l'extérieur. Nous ne comprenons pas pourquoi et nous ne trouvons rien qui puisse l'expliquer.  [...]

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

après avoir cherché à plusieurs reprises sur internet, je n'ai pas réussi à trouver le rôle de l'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN.   [...] Oui effectivement je confirme que l'utilisation de l'acétone est fait pour la précipitation des protéines, c'est vraie qu'on utilise généralement l'éthanol pour la précipitation des protéines, maintenant la précipitation à l'acétone est aussi plus efficace car, contrairement à l'éthanol, très peu de protéines sont solubles dans l'acétone.  [...]

[Biologie Cellulaire] Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

Maintenant il me reste à savoir si le protocole de fixation par l'éthanol et la glycine n'affecte pas les protéines MCherry.  [...] mais ça ne marquera que les cellules s'étant divisées en présence de BrdU. C'est un analogue de thymidine, il ne marque pas par exemple les cellules hors phase S.  [...]

[Biologie Cellulaire] Southern Blot, Northern Blot et Western Blot

Pour le principe, je vais faire simple. On fait un broyat de cellules (ou d'autres chose, ce qui compte c'est que ton matériel de base contienne les protéines que tu veux étudier). Ce broyat contenant des protéines est mis avec du SDS (Sodium-Dodecyl-Sulfate), cette molécule va déplier les protéines et les recouvrir de charges négatives (on parle de condition dénaturante).  [...] Souvent on ajoute aussi du beta-mercapto-ethanol (condition réductrice), cette molécule va supprimer les ponts disulfures des protéines par une réaction d'oxydo-réduction.  [...]