• Santé - éthanol, ADN, Tampon

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

normalement, avant d'éluer (EB ou H2O) la colonne est centrifugée pour faire passer le tampon de lavage puis recentrifugée a vide. Normalement plus un poil d'ethanol.  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

Quand tu as ta sauce d'ADN, tu utilises un alcool (style éthanol) pour précipiter ton ADN (car l'éthanol est hydrophobe). Tu utilises ensuite des ions chargés positivement (NH3+,...) pour rapprocher les différentes molécules d'ADN (qui sont chargée - à cause de leurs phosphates) et ça permet le regroupement des ADN entre eux, ceux qui les rend visibles.  [...] En bref, il faut precipiter l'ADN avec de l'Acetate de Sodium et de l'Ethanol 70% par agitation puis centrifugation. Il faut eliminer tout l'ethanol puis nettoyer le culot avec de l'Ethanol 100%. Apres une nouvelle centrifugation, l'Ethanol est eliminé et le culot d'ADN seché puis remis en suspension dans un tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

protéase / éthanol/ tampon de lyse / tampon de lavage tampon d'elution.  [...] Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

L'ADN est issu d'un broyat de foie de rat, il a été purifié par une exctraction phénolique, une précipitation dans de l'éthanol absolu et une resolubilisation dans un tampon d'élution TrisHCL 10mM + EDTA 1 mM à pH 8.  [...] J'avais pensé à une contamination par autre chose que des protéines, mais je vois mal ce qui a pu contaminer en absorbant à 260 pile, et ni à 280 ni à 320. Et surtout qu'est-ce qui peut contaminer mon ADN, à part des protéines Des restes de la lyse des hépatocytes Un truc de la solution tampon.  [...]

[Génétique] Principe de l'extraction d'ARN???

Les acides nucléiques sont adsorbés sur la colonne. L'éthanol 70%permet de faire précipiter les AN tout en procurant assez d'eau pour dissoudre les sels des tampons qui eux neutralisent les charges des AN.  [...] L'ADN et les prot résiduelles sont éliminées par les lavages (RW1 et RPE). L'éthanol du tampon permet aussi d'éluer selectivement l'ADN afin de n'obtenir que l'ARN au final.  [...]

Conservation d'ADN

J'ai cherché un peu sur internet et je suis tombé sur plusieurs site qui me disais de le conservé dans un tampon de tris (trishydroxyméthylaminométhane ) et d'EDTA à un pH=8.  [...] Malheureusement je n'ai trouvé aucune autre information. Combien je dois peser si je veux une solution de 1L et combien mettre d'EDTA (les formules me suffise je peux faire le calcul par la suite) Et aussi j'ai extrait mon adn avec du sel du vinaigre et je l'ai fait précipité avec de l'éthanol, est-ce que ça des risque d'interférer avec mon tampon Et pour finir, je vais le doser par spectrophotométrie UV, est-ce que mon tampon risque de brouiller l'analyse (même si je fais un blanc).  [...]

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

Sinon un problème récurrent est le lavage de la colonne qui se fait avec un tampon contenant plus de 70% d'éthanol, si il n'est pas bien fermé, l'éthanol s'échappe (en quelques heures) et au lieu de laver la colonne, tu élues ton ADN. donc t'en perds une bonne partie. Un bon réflexe est de le conserver à 4 degrés.  [...] Oui QUIAGEN. Pour ce qui est du lavage, je soumettrai cette idée à l'étudiant car c'est fort probable. Notre éthanol est conservé à température ambiante.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour résumer. détruire les cellules (qui ont été lavées dans un tampon) à l'aide d'un détergeant (SDS trouvable dans le commerce), faire une première centrifugation courte pour faire descendre tout les débris cellulaires, prélever le surnageant (où il y a l'ADN et des protéines), puis faire précipiter l'ADN à l'aide d'Ethanol et d'acetate de sodium.  [...] Pour l'éthanol, au labo, on en a deux sortes. L'éthanol 100% classique (en fait 99%), que l'on utilise pour les tampons etc... Et l'éthanol ultra pure (99,999% certifié) pour les manips les plus précieuses (précipitation de l'ADN par exemple). Et je confirme que le méthanol est de moins en moins utilisé, à cause des coups de son élimination (toxique, donc pas dans l'évier.).  [...]

Ethanol / Ethanol dénaturé

Pour des raisons de coût, j'aurai aimé savoir s'il était possible de remplacer l'éthanol pur que nous utilisons au labo par de l'éthanol dénaturé (avec une substance X ou Y). Je n'arrive pas trouver de réponse claire sur le sujet.  [...] Nous utilisons principalement notre éthanol dilué à 70% pour la désinfection du labo (paillasse, boite de pétri, hotte de culture cellulaire, vaisselle...) mais aussi, en ajout dans le tampon pour nos extractions d'ADN plasmidique.  [...]

[Identification] Extraction d'ADN

Homogénéiser doucement le contenu de l'Erlenmeyer, puis transférer 10 mL de ce filtrat dans l'éprouvette. Ajuster ensuite le volume jusqu'à 40 mL avec la solution froide d'éthanol à 90° (verser très délicatement et lentement la solution d'éthanol).  [...] Pour la question 3, je ne saurai pas décrire exactement le rôle de chaque produit. Par contre je pense que l'éthanol permet de cristaliser une fois mélanger avec le contenue afin de faire apparaitre l'ADN.().  [...]