• Santé - étape, Précipitation, ADN

[Biologie Moléculaire] lors de la purification de l'ADN plasmidique

je voudrais savoir est ce que le phenol-chloroforme appartient au étapes de la purification de l'ADN ou la précipitation de ceci par l'éthanol reste la dernière étape de la purification.  [...] je ne suis pas certains d'avoir compris. Si tu fais une lyse alcaline oui il y a une etape de phénol/chlorophorme suivi d'une précipitation de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...] Et bien en fait cela dépend également du but de ta manipulation. Si tu fait une extraction d'ADN pour faire une PCR conventionnelle derrière, le fait qu'il y ait un peu d'ARN n'est pas vraiment grave. Puisque seul les ADN seront amplifié (je grossis la chose).  [...]

[Biologie Moléculaire] Rôle du PEG dans l'extraction

Je fais des co-extractions ADN/ARN et la dernière étape de mon protocole est une précipitation au PEG 6000 (Polyéthylène glycol) pendant 2h à température ambiente.  [...] Ce qui m'intéresserait aussi, c'est de pouvoir baisser la température lors de la précipitation. C'est à dire au lieu de laisser les échantillons à T°C amb pendant 2h, de les laisser plutôt à 4°C même si le temps s'allonge. Pensez-vous que l'effet sera le même.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

j'avais précisé dans un post précédent que j'avais effectué une extraction d'ADN qui n'avais rien donné à la 1ère révélation. aujourd'hui je voulais m'en assurer en préparant un autre gel, le problème c'est qu'hier je n'ai obtenue aucune fluorescence contrairement à aujourd'hui.  [...] Je ne sais pas ce que tu veux faire avec ton ADN, mais si tu le quantifies A 260 il faut d'abord que tu degrades l'ARN et que tu repurifies l'ADN, sinon ta concentration va etre plus que fausse. Generalement dans les extractions old school il y a une etape de traitement a la RNase avant la precipitation.  [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse.  [...] Il a été montré qu'on pouvait précipiter l'ADN a temperature ambiante avec la meme efficacité qu'a -20°C. Cette croyance proviens du fait que l'ethanol deviens plus visqueux a basse temperature, mais ca n'a pas d'influence sur l'efficacité de précipitation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précipitation d'ADN linéaire

J'ai effectué une précipitation d'ADN linéaire et malgré mon application, mon rendement était de seulement 38%. Je voudrais simplement avoir des raisons plausibles qui pourraient expliquer un mauvais rendement, autre que des erreurs de manipulation basiques.  [...] Je manque un peu de détails pour faire un diagnostic mais en général les problèmes de rendement d'un précipitation d'ADN sont dus à deux facteurs.  [...]

extraction phénol chloroforme

Je rejoins cette avis. Il est clair que les kit sont un gain de temps non négligeable. Après, tout dépend de l'utilisation qu'on veut faire de son ADN. En terme de rendement rien ne vaut la méthode a l'ancienne.  [...] L'extraction phenol/chloroforme (ou old school ) ne permet pas à elle seule de faire une extraction d'ADN. Il faut faire une lyse des cellules (lyse alcaline ou pk ou...) et d'autres étapes d'extraction/purification/précipitation/lavages peuvent être ajoutées.  [...]

[Biologie Moléculaire] précipitation de l'ADN diminution de la taille de mon fragment!!!

je digère un vecteur d'environ 6000pb avec une enzyme de restriction qui coupe une seule fois dans ce vecteur. je vérifie ma digestion sur gel d'agarose...une belle bande à 6000pb. je décide de précipiter (avec de l'éthanol) l'ADN sur la nuit. le lendemain, je re-dépose sur gel.  [...] Serait-il possible que ton endonucléase de restriction ait une activité qui puisse être modifiée en présence de fortes teneurs en éthanol (admettons une gène sur le site de reconnaissance) entraînant un mésappariement et la catalyse d'une coupure non spécifique.   [...]

[Biologie Moléculaire] mutagenèse dirigée

et, es ce que la précipitation par les sels a les mêmes effets que celle produite par les solvants organiques sur la quantité d'ADN.  [...] pour l'ADN es ce que c'est vrai qu'avec la précipitation avec le sel, on aura de l'ADN plus concetré que celle en utilisant les solvants.  [...]

milieu de culture

Pour l'ADN plasmidique, pas de protéase. À la place, précipitation par saturation alcaline. Centrifugation, conservation du surnageant et élimination du culot. Enfin précipitation à l'éthanol.  [...] Merci et excusé moi si j'ai trop exagéré oui pour la croissance comme je vous es dit toute a l'heure j'ai mis une préculture en ISP4 liquide (2ml) laissé incubé a 30°C pendant 48h avec agitation et après la mettre dans un milieu ISP2 + 10% saccharose et incubé a 30°C pour 48h avec agitation.   [...]