• Santé - Enzymes, Restrictions, ADN, Cellule, Fragments

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction pourquoi elle ne clive pas tout les ADNs ?

j'ai une question pourquoi les enzymes de restrictions ne clive pas tout les ADNs par exemple HindIII ne clive pas l'ADN d'une cellule du foie humaine alors que pour l'ADN de phage lambda elle le clive en libérant plusieurs fragments comment ce la ce fait il.  [...] Tu sais que les enzymes de restriction ne clivent que si elles reconnaissent un site spécifique. S'il n'y a pas coupure, cela peut être à cause de deux raisons.  [...]

TPE sur l'ADN aide pour l'électrophorèse :)

pour couper l'adn je sait qu'on a l'habitude d'avoir recours a des enzymes de restriction qui sont spécifique a certaines séquence sur l'adn mais honnêtement ça me semble très compliquer de réaliser ça a votre niveau.  [...] Tu utilises des enzymes de restrictions (endo ou exonucléases) qui vont te faire pleins de petits bouts d'ADN. Tu vas faire migrer ces fragments d'adn sur membrane (électrophorèse) et tu vas avoir ce qu'on appelle un profil de migration électrophorétique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment séquencer un génome inconnu ?

J'ai pensé pour séquencer d'extraire l'ADN de l'organisme puis de digérer celui-ci avec des enzymes de restrictions. J'obtiens ainsi différents fragments dont les quelques nucléotides aux extrémités sont connus grâce aux sites de restrictions. Est-il possible alors d'y hybrider de façon spécifiques des sondes pour permettre un séquençage avec la méthode de Sanger par exemple (car les sondes sont plutôt longue par rapport aux sites de restriction non ).  [...] De nos jours, on ferait du séquençage haut débit. fragmentation de l'ADN et ajout d'adaptateurs connus aux extrémités pour faire en parallèle des millions de reads qui peuvent être alignés entre eux par chevauchement (contigs).  [...]

[Génétique] Rflp

1) -. sur le chromosome, un frgament de restriction est-ce bien un fragment entre deux sites de restrictions ( la ou les enzymes de restrictions peuvent couper l 'adn ).  [...] 3) Un profil de restriction est ce qu'on obtient apres avoir digéré de l'ADN par des enzymes de restriction et l'avoir fait migrer sur gel. On obtient des bandes qui correspondent a des fragments de restriction. pour détecter les différences alléliques par cette méthode, il faut bien sur que la différence cause une modification, une apparition ou une disparition d'un site de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'hybridation ADN/ADN "les différent méthodes???"

Par contre si tu ne sais pas quelles bactéries tu as dans ta petite boite, ben il va falloir commencer par des recherches du séquencage et encore de la bioinfo.   [...] Il y a aussi la technique du RFLP. il s'agit de comparer des profils de restrictions par une enzyme à faible fréquence de coupures suivi d'une électrophorèse particulière car il s'agit de distinguer de très gros fragments d'ADN génomiques (électrophorèse en champ pulsé).  [...]

[Biologie Moléculaire] problème de primers

Une autre approche serait de sous-cloner des fragments de ta région de 11 Kb (ex. 4 fragments de 2.75 Kb)...et de jongler pour recloner un fragment final de 11 Kb.  [...] jongler. une fois que tu as cloné des sous-fragments il faut les réassocier c'est à dire trouver un jeu d'enzymes de restrictions adéquat (sites uniques).  [...]

[biologie moleculaire] Cartographie du genome

dans la catographie physique du genome humain je ne comprend pas comment les clones s ordonnent le long du chromosome et comment peut on grace a cela connaitre la sequence exacte est ce qu on doit faire un sequencage avant c pas clair dutout merci pour votre aide.   [...] Pour realiser une cartographie physique on sequence les différents clones, ces clones possèdent des fragments du chromosome a cartographier et ses fragments sont chevauchant (car digestion partielle par des enzymes de restrictions) donc les sequences des différents fragment sont ensuite alignées par ordinateur grace aux sequences chevauchante.  [...]

levure s. POMBE

.. Enfin, d'après ce que j'ai pu lire sur les étapes que tu as proposé, selon moi (je tiens à préciser que ca n'engage que moi) cela parait correct. J'aurai juste précisé les techniques qui permettrai d'isoler le peptide (enzymes de restrictions, amplifications du peptide, etc), d'insérer le fragment d'ADN de manière stable dans la levure (si possible sur des plasmides à haut niveau de réplication genre 2microns), et j'aurai précisé pourquoi choisir S.  [...] Effectivement, ce que je voulais dire au niveau de l'enzyme de restriction, c'était au niveau de la séquence codante pour le peptide... et non pas le peptide en tant que tel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

vous pouvez utilisez 2 enzymes de restrictions aussi..mais cette fois vous allez remplacer une séquence du vecteur (elle va être coupée par 2 enzymes différents, chaqu'un d'un coté )par votre séquence d'ADN (qui va être aussi coupée par lé deux)...P.  [...] Hormis certaines remarques faites ci haut,on doit prendre aussi en compte le fait que le clonage depend de l'objectif du travail.Si par exemple on veur cloner l'ORF tout entier,on fait le choix de 2 sites de restriction enzymes teste au prealable car les 2 sites,il ne faut pas que ils se retrouvent dans le gene,en plus pour l'orientation du gene et aussi en fonction de disponibilite des enzymes de restriction au laboratoire.  [...]

[génétique] L'empreinte génétique et le test de paternité

Ca ne veut pas dire pour autant qu'ils ont le même code génétique, car l'empreinte génétique compare seulement certains endroits précis du génome (au moyen d'enzymes de restrictions qui coupent l'ADN à des endroits déterminés).  [...] - les mytochondries (qui contiennent un ADN spécifique) sont transmises uniquement par la mère, il est donc possible de suivre des générations de femmes de cette façon -nous avons tous l'ADN mytochondriales de notre grand-mère - génétique - maternelle).  [...]