• Santé - Enzymes, Protéine, Fragments

La maladie d'Alzheimer | Dossier

Les enzymes agissent sur la protéine amyloïde de précurseur et le coupent en fragments de protéine, dont un s'appelle bêta-amyloïde et est crucial dans la formation des plaques séniles en Alzheimer.  [...] 72 % des personnes résidant en maison de retraite sont atteintes de la maladie d'Alzheimer ou d'une maladie apparentée. Environ 600 000 personnes en France souffrent de cette maladie et 850 000 d'une maladie apparentée. 225 000 nouveaux cas sont diagnostiqués chaque année.   [...]

[Biotechnologie] spectrometrie de masse

Une protéine étant trop grosse pour être analysé en spectrométrie de masse simple (qui ne fait pas que séparer des molécules quand il est couplé à une HPLC mais qui établi aussi des spectres de fragmentations permettant de déduire la structure de la molécule), on trypsinise la protéine (on la coupe avec une enzyme), on la passe dans un spectrométre de masse qui va fragmenter les peptides en de plus petits fragments, à la sortie il y a un triage des fragments (grâce à une triple quadrupole) et à nouveau leur fragmentation par un deuxième spectromètre de masse pour faire des fragments encore plus petits et qui là vont pouvoir être captés et analysés par ce deuxième spectromètre de masse couplé à un ordinateur pour faire l'analyse du spectre de masse.  [...] Ce qu'il faut avoir a l'esprit, c'est que la masse d'un peptide est statistiquement unique au dela de 6 ou 7 acides amines (je ne sais plus exactement). En comparant les masses des peptides obtenus aux masses theoriques que l'on peut obtenir a partir d'une base de donnees de proteine, on peut identifier ainsi la sequence a partir de la masse (algorithme Mascot).  [...]

[Biochimie] Fonction de la protéine A-Sepharose ?

De l'ADN extrait de cellules humaines en culture ( cellules Hela ) a été purifié puis digéré par une enzyme de restriction (digestion totale),. aprés la digestion, les fragments sont marqués en 5'. une partie de la préparation est conservée à 4°C, l'autre partie est incubée successivement en présence de protéine p53, d'anticorps anti-p53, puis de protéine A-Sepharose.  [...] Dans un vieux tiroir de ma mémoire, quelque chose me dit que la protéine A se colle au fragment Fc des anticorps. La sépharose servant à culoter ce que la protéine A a collé.  [...]

[Physiologie] transfusion de sang

une question m'intrigue vraiment.est-ce qu'On peut transfuser les sang des animaux dans l'organisme humainscar certeins animaux ont les meme groupes sanguins que les humains..alors pourquoi pas.   [...] Autre question. il existe des enzymes protéolytiques qui clivent les anticorps soit en 2 frangement Fab et 1fragment Fc (action de la papaine), soit en 1 fragment Fab ' 2 (action de la pepsine), je vouderai connaître leurs but à quoi ça sert d'éliminer ces fragments.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

En fait, on a fait notre electrophorese sur plusieurs especes de E.coli, HRPN PGAG PCK3 et PLTR avec ECOR1 et HINDIII, une autre chose que je n'ai pas comprise, c'est. Est ce que c'est enzymes de restriction vont séparer les plasmides avec le même nombre de fragments A priori non.  [...] Le nombre de fragments dépend du nombre de site de restriction qu'il y a sur ton plasmide. S'il y a deux sites, tu auras 2 fragments linéaires, 3 sites 3 fragments etc. Le truc c'est que tu auras forcément un mélange des formes non digérées et des formes digérées (voir des formes partiellement digérées).  [...]

[Biochimie] clonage

Fais une digestion de ton plasmide avec tes enzymes, puis tu fais une électrophorèse sur gel ( de ton plasmide). Si tu as fait une digestion avec deux enzymes, tu devrais voir deux fragments en principe.  [...] mes inserts sont des produits de PCR, sur gel d'agarose c'est Ok j'ai des fragments avec les tailles attendues, les enzymes utilisées sont pour le plasmide BamH1-HF-EcoRI HF, pour le premier insert BamHI HF-NdeI et pour le second. NdeI-EcoRIHF, pour les quantités j'ai utilisé un rapport de 1-5 et dans une autre tentative1-3.  [...]

Déterminer état de dimérisation d'une protéine

En gros tu as tes deux protéines liées par liaisons faibles, le plus simple c'est de les lier de manière covalente par XXX (j'ai oublié...) et après tu digère par enzymes et tu analyses par spectro de masse les fragments (MS puis MS/MS pour avoir la séquence) puis à la main ou par bio info tu aligne les sequences et tu peux retrouver quelle partie va ou, c'est pas hyper précis mais au moins tu connait les protagonistes et tu a une idée générale des zones d'interraction ou de non interraction.  [...] Il suffit de faire une droite de calibration avec des protéines (monomériques) dont le MW est connu. On met le MW en fonction du temps d'élution et on regarde à quel MW correspond le temps d'élution de notre protéine. On peut alors savoir de quel oligomère il s'agit.  [...]

[Génétique] Dm sur la myopathie de Duchenne

2) les bandes ne sont pas le chromosome X mais un fragment du gène considéré. Les 2 allèles ont des séquences différentes, donc les enzymes de restriction coupent en des endroits différents, donc les fragments obtenus n'ont pas la même taille.  [...] l'analyse du document 2 permet de voir que les enzymes de restriction coupent l'ADN en reconnaissant une séquence particulière de désoxunucléotides, les fragments n'ont donc pas la même taille. Les fragments obtenus sont plus petit 1,3kb. L'allèle muté est mis en évidence.  [...]

dégradation de protéine recombinante

Si tu n'as pas accès à une FPLC ou HPLC, le mieux est de tenter une échangeuse d'ion. Vu la différence de taille entre ta protéine et les deux fragments, il y a de bonnes chances pour que leurs pI soient suffisamment éloignés pour que ça marche. Il existe des colonnes jetables en plastique (biorad), tu achetes de la resine (DEAE pour echangeuse d'anions, phosphocellulose pour echangeuse de cations) et tu peux faire des manipes pour des années.  [...] Si ta protéine est protéolysée, on s'attend à ce que l'extrémité His-tag soit la première à être coupée étant donné qu'elle est flexible. Donc tu ne peux pas savoir par un simple blot anti-His si il s'agit de fragments de ta protéine ou pas.  [...]

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

A priori je dirai immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), dont le principe consisite à fixer la séquence d'ADN à laquelle tu t'intéresse sur des billes d'une colonne de chromato, puis à faire passer dans cette colonne les protéines dont tu suspectes la liaison à la séquence considérée. Après élution, tu récupères la protéines liée.  [...] En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.  [...]