• Santé - Enzymes, Plasmide, Intérêt

[Biologie Moléculaire] Clonage Gateway...intérêt ?

- un premier intérêt est celui que tu dis. tu n'utilises pas d'enzymes, pas besoin de choisir 2 enzymes différentes, de déphosphoryler le plasmide, phosphoryler les primers...ect... une simple PCR suffit pour l'obtention de ton gène avec les séquences nécessaires à l'introduction dans le plasmide.  [...] ça revient au même qu'avec les enzymes pour l'insertion dans ton second vecteur sauf que là encore, tu n'a pas besoin de rédigérer ton fragment à partir de ton premier plasmide pour le mettre dans un plasmide d'expression. Ici, avec le système gateway, ton plasmide d'entré va directement servir à la recombinaison avec ton second plasmide.  [...]

[Biotechnologie] Projet de biotechnologies

Le but était de trouver les bactéries possédant la voie métabolique de dégradation du styrène la plus complète. Les bactéries concernées ne possédaient pas une ou deux enzymes nécessaires pour que la voie d'intérêt soit complète donc nous avions proposer d'intégrer un plasmide codant la ou les enzymes manquantes chez ces bactéries pour qu'elles soient opérationnelles dans le but recherché.  [...] Une autre partie du projet consistait à prendre une souche d'E.coli et de lui permettre elle aussi de dégrader le styrène. Donc là il fallait faire à peu près la même chose que précédemment sauf que la quantité d'enzymes à intégrer par génie génétique était un peu plus importante.  [...]

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

Les plasmides utilisés en recherche sont souvent des plasmides très modifiés par les sociétés qui les vendent. Afin de pouvoir insérer facilement des portions d'ADN d'intérêt dans le plasmide, on a prit l'habitude de placer des sites de restriction. C'est à dire des sites reconnus par des enzymes capables de couper l'ADN.  [...] L'avantage de ces enzymes est qu'ils coupent des séquences en acide aminés très spécifiques et forment (souvent) ce qu'on appelle des bouts collants (ils ne coupent pas les doubles-brins nets mais laisse dépasser un des deux brins). L'intérêt de ceci est qu'un bout collant généré par une enzyme de restriction aura tendance à s'attacher à un bout collant généré par la même enzyme.  [...]

[Biochimie] Introduction d'un gène

Bonjour, là je suis bloquée sur un léger problème, je dois inséré un gène dans le vecteur pet11b et j'ai de la difficulté à choisir les enzymes que je dois utiliser pour mon vecteur pet11b et mon plasmide contenant mon gène d'intéret Biomol. Les cartes sont en fichiers attachés.  [...] Et je dois aussi donner les patrons de digestion pour les 2 orientations.De l'aide serai très apprécié. J'ai une petite idée mais j'aimerais avoir votre opinion. Merci beaucoup d'avance.   [...]

[Biologie Cellulaire] Utilisation de l'ADNc

Y a t'il d'autre utilisation d'adn complementaire hormis l'introduction de ces ADNc dans des plasmides pour l'obtention d'une grande quantité d'adnc.  [...] Moins de problèmes de PCR, moins de problèmes pour les intégrer dans des plasmides, moins de problèmes pour la transfection (plus le plasmide est gros, moins la transfection est efficace), moins de problèmes pour choisir des enzymes de restrictions qui ne coupent pas à l'intérieur de notre séquence d'intérêt, et j'en passe.  [...]

vecteurs intégratifs

Pour faire de la recombinaison homologue, pour intégrer un transgène par exemple, il faut privilégier la linéarisation de ton plasmide portant un gène d'intérêt. Le plasmide étant d'une forme plutôt circulaire (ce n'est pas exactement vrai en réalité, mais c'est pour simplifier), en le traitant avec des enzymes de restriction adéquates, tu vas le le rendre linéaire.  [...] La presence d'extrémités libres va induire la recombinaison qui chez cerevisiae est quasiment à 100% de la recombinaison homologue. Si tu linéarises ton plasmide dans un gènes alors c'est au niveau du site de linéarisation que l'intégration s'effectuera, ca te permet de l'intégrer précisément.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Ma question du jour, c'est de savoir le mecanisme d'action d'une ADN ligase en général et dans mon cas pour le clonage d'un géne d'interet dans un plasmide (PICZ) qui sont les deux digérés par les mémes enzymes de restriction (SFII et NOTI).  [...] - Traitement du plasmide receveur avec les enzymes de restrictions, puis traitement à la phosphatase alcaline (aussi cela évitera que le plasmide se recircularise quand vous rajouterez la ligase et l'ATP.) et purification.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.  [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]

[Biologie végétale] Compréhension d'un article sur les OGMs

Pour moi, pour générer un OGM, on devait ajouter ou utiliser des sites de restrictions déjà présent et cliver ces derniers par une enzyme de restriction (ER) d'une part dans le gène d'intérêt que l'on veut ajouter dans l'OGM et d'autre part dans le plasmide ou vecteur qui transportera ce gène d'intérêt.  [...] 2) En 2.4 ils parlent de deux méthodes. Freeze-thaw et leaf disc. Le freeze thaw permet simplement de briser les cellules d' Agrobacterium tumefaciens pour que les vecteurs contenant le gène d'intérêt (qui remplaceraient donc le plasmide Ti ) entrent dans la cellule.  [...]

Définition | Clonage | Futura Santé

Une fois que le gène d'intérêt a été isolé, il faut l'insérer dans un vecteur, qui peut être un plasmide bactérien. Souvent ces plasmides portent des gènes de résistance aux antibiotiques pour faciliter leur sélection. Le gène est inséré dans le plasmide et ce dernier est introduit dans une bactérie, comme Escherichia coli.  [...] Les bactéries portant le plasmide recombiné sont clonées. le clone bactérien portera un grand nombre de copies du gène d'intérêt porté par le plasmide.  [...]