• Santé - Enzymes, Fragment, ADN

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

J'ai effectivement coupé l'autre extrémité de mon insert avec une autre enzyme pour m'affranchir de toutes les étapes de phosphorylation / déphosphorylation. Et encore, ma ligase a des propriétés de polymérase et est capable de réparer l'ADN avant la ligation, si bien qu'elle peut quand même lier deux extremités cohésives différentes.  [...] Ce que je veux dire c'est que je ne comprends pas pourquoi ces enzymes ne s'attaquent qu'à des sites de cette forme et non pas à d'autres sites.  [...]

[Biotechnologie] Construction plasmidique

Premièrement je digère un fragment d'ADN génomique avec les enzymes de restriction afin de récupérer le gène à intégrer.  [...] Ensuite digestion des amplifiats obtenues par des enzymes encadrant le gène, et correspondant à là où tu veux le mettre dans ton nouveau plasmide, afin de le récupérer. Par contre si par construction plasmidique tu entend, logiquement, construire un plasmide entier, alors là lors de l'amplification des parties géniques sur des plasmides de stockage, les primers que tu utilise doivent posséder une partie liant le template et une partie non liant appelée overlap, d'au moins 40bp.  [...]

[Biologie Moléculaire] unité taq DNA pol

La definition de l'unité enzymatique des Taq polymérases varient légèrement d'un fabriquant à l'autre. Mais en gros, on peut dire qu'une unité correspond à la quantité d'enzymes permettant l'incorporation de 10-15nmol de dNTP dans un fragment d'ADN en 30 minutes et à 75°C.  [...] Pour les enzymes on utilise même des P10 et des P2 qui descendent a 0,2µL avec précision, la P20 ne permet pas par exemple d'ajouter 0,5µL de Taq dans un tube. Je vous donne la définition d'une unité chez invitrogen. One unit incorporates 10 nmol of deoxyribonucleotide into acid precipitable material in 30' at 74°C.  [...]

[Microbiologie] Pcr

Ce n'est pas faire une morale pour la faire, mais comprends que des messages comme ça sont plutôt peu appréciés et moyennement pris en compte.   [...] PCR. On cherche à amplifier des fragment d'ADN, n'est ce pas Première chose à avoir. les briques élémentaires que sont les nucléotides. Le reste je te laisse un peu chercher. Penses qu'il faut faire une réaction, donc sûrement des enzymes impliquées, des conditions à respecter pour qu'elles fonctionnent etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] RFLP: génie génétique et diagnostiques

Bref je ne comprend pas comment en analysant l'adn,on peut dire qu'un individus est heterozygotes et comment il a de l'adn plus long(3 segment)[il n'y a quand même pas un fragment en plus chez l'adn des heterozygotes].  [...] C'est pas un fragment d'adn en plus c'est qu'entre 2 allèle la séquence n'est pas la meme donc les enzymes de restriction ne les digère pas de la meme maniere.  [...]

[Génétique] Plusieur question?

Oui et non. La séquence nucléotidique est un fragment d'ADN, mais dont normalement on connait justement la séquence, on sait donc ce que c'est.  [...] Pour être plus précis, on peut dire qu'un fragment d'ADN est une séquence nucléotidique mais une séquence nucléotidique peut également être un fragment d'ARN. Donc ce n'est pas une équivalence stricte.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réparation mutation, structure Holliday

Ce court fragment est perdu, et c'est là que la RecA intervient, elle va incorporer le fragment d'ADN manquant à partir du brin d'ADN parentale, puis il y'a l'intervention d'une autre enzyme d'excision-resynthése qui va éliminer l'erreur et comblé la lacune au niveau du brin parentale.  [...] Lors de l'analyse des allèles dans une famille dans laquelle on cherche la présence d'un fragment connu, On peut utiliser 2 techniques. RFLP ou Carte de restriction, bien que je les connaisse en gros, je ne comprends pas bien pourquoi ce serait plus rapide (ou simple) avec les enzymes de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

En conclusion ça m'apparait paradoxal avec ce que tu viens de me dire puisqu'il est dit que ce fameux fragment (qui est une enzyme) a ces deux activités. Où est le boeug.  [...] en gros les 2 réplications eucaryote et procaryote sont très similaires que dans leurs grands principes (bidirectionnelle, antiparallèle, sens 5'3', complémentaire, nécessite des amorces) mais pas dans les détails (enzymes pas meme fonction c'est le cas pour ce que j'ai dit précedemment ou encore inexistence des fragments de Kleenow chez les procaryotes. (n'est-ce pas)).  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN polymérase à activité exo3'-5'

Les ADN-topoisomérases de type I et II sont présentes dans toutes les cellules eucaryotes et procaryotes. Ces enzymes résolvent les problèmes topologiques dans tous les aspects du métabolisme de l'ADN. Cette caractéristique leur donne un rôle indispensable à la vie cellulaire.  [...] L'ADN polymérase I qui est extraite d' E.coli possède deux propriétés exonucléasiques. (5' à 3') et (3' à 5'). Cependant on utilise souvent une enzyme préparée à partir de l'ADN polymérase I qui est appelée fragment de KLENOW et qui ne posséde que l'activité exonucléasique 3' à 5'.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

Ce que je sais, c'est que quand on insert un fragment d'ADN, on s'arrange souvent pour le mettre en plein dans LacZ, qui code pour la beta-galactosidase. Comme il ne peut plus produire cette enzyme, le lactose n'est plus dégradé.  [...] Un dernier point le semble un peu sombre. l'IPTG permet d'induire la production de beta galactosidase (quand LacZ est fonctionnel), qui utilisera le X-gal, dans le cas de LacZ fonctionnel. Mais alors, pourquoi n'utilise-t-on pas tout bêtement directement du lactose, dans un milieu supplémenté en X-gal, pour induire la production de beta galactosidase Est-ce que c'est parce que l'enzyme préférerait alors utiliser seulement le lactose, et pas le X-gal, et donc on ne pourrait voir aucune différence entre les bactéries.  [...]