• Santé - Enzymes, Activité, Digestion, Tampon

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Ensuite, il n'est pas possible de mélanger toute les enzymes. Soyons fou, et admettons que tu veuille mettre ton plasmide et tes 6 enzymes en même temps. Tu va devoir choisir un tampon de digestion (ph, concentration en sel) unique pour toute tes enzymes. et certaines ne fonctionneront alors pas (enfin, il est possible une astuce, mais pas avec un choix restreint d'Ez).  [...] Le deuxième problème est la concentration en glycerol. Généralement, les enzymes sont suspendu dans un tampon coupé à 50% de glycerol, afin d'éviter les cycles de congélation/décongélation, qui abimeraient l'enzyme. Cependant, le glycerol est très mauvais pour l'activité de l'enzyme, et communément, ont admet que la quantité d'enzyme (+glycérol) ne dois pas dépasser 10% du volume total de digestion.  [...]

Couche-tard ou lève-tôt : des causes biologiques au coeur de nos cellules

Ce rythme circadien personnel n'est pas qu'une simple question d'habitude. La nature a fait de nous des animaux diurnes et ce cycle modifie considérablement un grand nombre de fonctions biologiques, des capacités intellectuelles à la digestion en passant par l'activité rénale ou les secrétions d' enzymes.  [...] Le gène de cette enzyme a été introduit par génie génétique à côté de l'un des gènes (Bmal1) connu pour avoir une activité circadienne.  [...]

[Biochimie] Localisation de la B-galactosidase

Je voudrais savoir où se situe PRECISEMENT la B-galactosidase dans le corps humain. Peut-elle fonctionner à un pH de 4.2 (j'ai vu sur wikipédia pH optimum entre 6 et 8 mais existe-t-il d'autres formes de cette enzyme Car j'ai également vu sur un site anglais qu'elle pouvait fonctionner comme un lysozyme à pH = 4.5).  [...] Bsr, à partir de mes restreintes informations sur cet enzyme, je peux vous dire ( je crois ) que le B-galactosidase est l'enzyme qui fait catalyser l'hydrolyse du lactose en glucose et galactose, donc elle appartient à des enzymes de digestion, donc dans le système digestif, et pour l'acidité, on a manipulé cette réaction in vitro avec un tampon pH 7. je ne sais plus de ça dsl ^^.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole pour une ligature + tranformation ?

Oui, il vaut mieux purifier après digestion parce que tes enzymes et le tampon risquent de gêner la ligation. Moi je purifie avec le même kit de Promega que pour purifier les PCR sur gel. Mais y a toujours des pertes.  [...] Certaines enzymes necessitent l'ajout de BSA dans le tampon, mais la BSA ne gène l'activité d'aucune enzyme de restrction. Donc si tu as une enzyme necessitant BSA et pas l'autre, pas de souci.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Ensuite qu'elles sont les conditions de tes digestions Car BamHI et NotI ont une star activity qui peut être induite par une digestion trop longue ou alors par une concentration en glycerol trop importante dans ton mix réactionnel.  [...] Pour les conditions de digestion, j'ai travaillé avec des enzymes Fermentas je suis aller sur leur site, ils proposent de faire une double digestion dans du tampon BamHI avec 2fois plus d'enzyme NotI que BamHI. J'ai digéré 5µg pendant un peu plus de 2h00.  [...]

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction électrophorèse

Oui je suis d'accor il n'y a qu'un seul site bamHI car 1 seul bande mais j'ai auusi 2 site ecoRI car jobtien de bandes après digestion. Ce que je ne compren pas c'est que je n'obtien qu'une bande lors de la double digestion, est-il possible alor que lors de cette double digestion les enzymes bamHI et ecoRI aient coupé au même endroit.  [...] Sinon cela peut-être du à l'activité star de bamHI qui est capable de reconnaitre les sites de EcoRI mais dans ce cas là, on en revient toujours au même, pour la double digestion, j'aurais dut obtenir les mêmes fragments que pour ceux de ecoRI.  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation de Klenow

il faut inactiver l'enzyme préalablement, sinon elle va continuer a couper. Pas besoin de purifier le plasmide, tu peux le faire ensuite. Il faut quand même que la klenow puisse fonctionner dans le tampon utilisé pour la digestion.  [...] Par habitude, desactive toujours ton enzyme avant de faire autre chose car en changeant de tampon tu peux modifier la spécificité de son activité.  [...]

[Biologie Cellulaire] Endosomes

Bonjour,je suis actuellement étudiant en seconde année de biologie-biochimie, et il y a une notion qui n'est pas claire pour moi concernant les endosomes, d'où ces petites questions pour m'éclairer.   [...] Une vésicule se dénude de son manteau de clarine, et fusionne avec un endosome précoce PH=7 (qui est un ensemble de vésicules), ensuite, des versicules à hydrolases, qui sont issues du RE, viennent y fusionner, ramenant des enzymes digestives et sur leurs membranes des pompes à protons, qui permettent la baisse du PH, activant les enzymes, lorsque le PH= 6 c'est un endosome tardif, plus les H+ y pénètrent, plus le PH baisse, et au tour de 5, c'est un lysosome (digestion).  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction sur plasmides- Digestion complète et incomplète

Par exemple, pour un plasmide ayant 3 sites de coupures, le nombre de fragments attendu (théorique) est de 6 si l'on considère tout les fragments possible et imaginable. Mais dans le cas d'une digestion incomplète, comment savoir s'il y aura 1 seul site ou 2 site qui seront impliqué dans la digestion du plasmide.  [...] aussi je cherche a savoir comment trouver la taille du vecteur pSK (environ 2900 pb) abres la double digestion par ces deux mêmes enzymes.  [...]

Définition | Lysosome | Futura Santé

Le lysosome est une petite structure sphérique (une vésicule) délimitée par une membrane lipidique située dans le cytoplasme des cellules eucaryotes. La membrane contient des canaux ioniques (des pompes à protons ) qui permet l'entrée active de ions H+, afin de maintenir un pH acide (entre 3,5 et 5) au sein de la vésicule lysosomale.  [...] Le lysosome a une fonction de poubelle cellulaire, où les molécules non fonctionnelles sont éliminées par digestion. Le lysosome contient des hydrolases, des enzymes destinées à la dégradation de molécules intracellulaires. Elles ne sont actives qu'à pH acide, d'où l'abaissement du pH dans la vésicule.  [...]