• Santé - Enzyme, Site, Promoteur

[Biochimie] nucléase

Si tu coupes avec deux enzymes différentes, les extrémités générées ne seront pas complémentaires l'une à l'autre puisque les enzymes vont couper différemment (le site de restriction n'est pas le même et le type de coupure non plus).  [...] Admettons voilà ton plasmide ouvert par deux enzymes différentes, une bleue une violette. -PROMOTEUR- site Enzyme de restriction 1 (du vide) site Enzyme de restriction 2 - TERMINATEUR-et on rejoint le promoteur puisque le plasmide est circulaire.  [...]

[Génétique] Mécanisme de transcription

ensuite le promoteur est une molécule qui permet le début de la transcription en permettant à l'enzyme de se fixer à l'adn et de reconnaitre le site d'initiation, d'où commencera la transcription.  [...] Le promoteur contient donc les boites -35, -10 et le site d'initiation de la transcription +1, l'ensemble porte le nom de promoteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in-vitro

Je me demandais pourquoi, lors d'une transcription in-vitro, on doit obligatoirement linéariser le vecteur contenant l'ADN d'intérêt. Par exemple j'ai cloné mon ADN dans le vecteur pSFV1 pour le transcrire in-vitro je dois linéariser le vecteur à l'aide de l'enzyme Spe1 dont le site est situé juste avant le promoteur SP6 nécessaire à la transcription.  [...] Merci pour cette réponse. En fait le site de coupure est plutôt situé à la fin de la queue poly A et non juste avant le promoteur SP6 ce qui correspond à ce que vous avez dit. Je ne savais pas que l'on appelais cela un run OFF, après avoir fait quelques petites recherches dessus c'est beaucoup plus claire maintenant.  [...]

cre lox et recombinaison homologue

Euuuh, pour moi le système Cre/Lox servait a exprimer/inhiber un gène a un instant t déterminé par l'expérimentateur.. Le gène Cre code pour une enzyme recombinante, qui est flanqué d'un promoteur inductible (Inductible par n'importe quoi, aux choix, température, concentration de glucose, expression d'un facteur particulier...).  [...] Une fois que ce promoteur est activé, l'enzyme est synthétisée et va reconnaître les sites Lox sur le génome. Le gène a réprimer a été préalablement encadré des séquences Lox et l'enzyme Cre nouvellement exprimée va exciser la partie entre les deux sites Lox.  [...]

[Biologie Cellulaire] Promoteur/ site de fixation de ARN polymérase / site d'initiation de la transcription

Le promoteur c'est une très longue séquence non codante situé en 5', avant ton gène. Elle englobe le site de fixation de la polymérase, des enhancers, des silencers et des éléments CIS modulateurs (permettant la fixation de facteurs de transcription pour réguler la transcription et le complexe d'initiation de la transcription),  [...] Le site d'initiation de la transcription correspond généralement au nucléotide +1 de ton gène car c'est le premier nucléotide qui est transcrit. Ce nucléotide +1 ne fait pas partie du promoteur, c'est le début du gène à transcrire. (pour plus d'info sur le site d'initiation de la transcription j'ai mis le lien d'une ancienne discussion sur le forum.  [...]

[Biochimie] pBluescript II KS

Bonjour, j'aimerais savoir que signifie le KS à la fin de PBluescript II KS.   [...] Le plasmide KS a le site de restriction pour KpnI proche du promoteur LacZ alors que le plasmide SK a le site pour SacI proche du promoteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] analyse gène

on me demande d'analyser une séquence d'un gène d'une espèce bactérienne et de repérer ses promoteur et ribosomes bindings site.  [...] Chez les bactéries l'initiation de la traduction se fait après association du ribosome avec une région contenant un site de fixation pour la petite sous unité du ribosome. Cette région (Ribosome Binding Site ou RBS) renferme une séquence complémentaire de l'extrémité 5' de l'ARN 16S (le Shine-Dalgarno.  [...]

Clonage orienté

Je suis bloquée, j'ai un peu de mal avec les enzymes de restrictions et je comprend pas tout à fait ce que l'on me demande. Sachant que l'on veut un clonage orienté, on me demande de choisir les enzymes de restrictions utilisable du côté de la bordure portant la séquence du promoteur T7 sachant que le fragment d'intérêt contient un site SacII.  [...] Si c'est bien le cas, cela signifie que tu ne peux pas utiliser SacII pour le clonage. En effet, le clonage va consister à amplifier ton insert avec des oligos de PCR portant des sites de digestion aux enzyme de restriction voulues. On ne veut donc pas que la digestion en question coupe ton insert en deux.  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

1/Insertion du GAL4 avec un promoteur GMR en amont de ce gène dans l'élément P à l'aide d'enzyme de restriction pour retirer le gène dont le produit conduit à la transposase (enzyme). on obtient donc un élément P modifié.  [...] 5/Insertion de LacZ avec un promoteur UAS en amont de ce gène dans l'élément P à l'aide d'enzyme de restriction pour retirer le gène dont le produit conduit à la transposase (enzyme). on obtient donc un élément P modifié.  [...]

[Biotechnologie] Composants d'un vecteur d'expression eucaryote

J'aurai mis un gène de sélection (un gène de résistance aux antibiotique ou un gène du métabolisme pr la levure) et un gène rapporteur, un promoteur, MCS (un site de clonage multiple). Tu peux mettre le + 1 avec la flèche juste après le promoteur.  [...] Merci mais je sais comment ça fonctionne. C'est un vecteur d'expression donc pourquoi vouloir un promoteur et pas de site polyA.  [...]